人输血传播病毒（TTV）ELISA试剂盒使用说明书

人输血传播病毒(TTV)ELISA试剂盒操作步骤：

1.取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。

2.分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。

标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。稀释后各管浓度分别是：1000 pg/ml,500 pg/ml,250 pg/ml, pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,0 pg/ml。

注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。

3.加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加标记的抗ACH 抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6.加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。

7.温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。

8.洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸*拍干。

9.显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。

10.终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。

11.读板：在450nm波长读取各孔的OD值。

注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。

人输血传播病毒(TTV)ELISA试剂盒数据计算

1.绘制标准曲线：各标准品OD值减去底色即减去空白孔OD值，以6个标准品的OD值为纵坐标y，以标准品的浓度为横坐标x，绘制曲线图，如图示，并计算出回归方程y=ax+b。

2.将待测样品的OD值代入方程式，计算各组样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际ACH浓度。

3.敏感度：1.0 pg/ml

注意事项：

1.实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。

2.加样：加样时，要控制加样速度，避免孔与zui后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。

3.孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。

4.反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。

5.建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。

6.建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。

安全性

1.避免人体直接接触显色剂A、B和终止液。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2.实验中不要进食、抽烟或使用化妆品。

3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

人输血传播病毒(TTV)ELISA试剂盒保存条件及有效期：

1.试剂盒保存：2-8℃

2.有效期：6个月