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Human Brain Derived Neurotrophic
Facor（BDNF） ELISA Kit
 
 
 
 
Catalog No. CSB-E04501h
（96 tests）
 
 
 
 
 
  This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of human
BDNF concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
 
 
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INTRODUCTION
BDNF  is  a  13  kDa,  119  amino  acid  （aa）  residue  non-glycosylated
polypeptide whose  primary  structure  is  conserved  among  all mammalian
species examined. Initially synthesized as a 247 aa residue prepropeptide,
the BDNF molecule is divided into an 18 aa residue signal sequence, a 110
aa residue prosequence, and a 119 aa residue mature segment. Similar to
other  neurotrophic  factors,  there  is  a  possibility  that  the  N-terminus  is
alternatively  spliced,  giving  rise  to a  longer pre-prosegment  （but  identical
mature segment） with different functional properties. As a mature molecule,
BDNF  is  52%  identical  to  NGF  at  the  amino  acid  level,  exists  as  a
noncovalently-linked  homodimer  in  solution,  and  contains  six  cysteine
residues that are believed to form three intrachain disulfide linkages. BDNF
in plasma is detected in the pg/mL  
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The  microtiter  plate  provided  in  this  kit  has  been  pre-coated  with  an
antibody  specific  to BDNF. Standards  or  samples  are  then  added  to  the
appropriate  microtiter  plate  wells  with  a  Horseradish  Peroxidase  （HRP）
-conjugated  antibody  preparation  specific  for BDNF  and  incubated.  Then
substrate solutions are added to each well. The enzyme-substrate reaction
is  terminated  by  the  addition  of  a  sulphuric  acid  solution  and  the  color
change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2
nm.  The  concentration  of  BDNF  in  the  samples  is  then  determined  by
comparing the O.D. of the samples to the standard curve. 
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DETECTION RANGE
0.62  ng/ml-20  ng/ml.  The  standard  curve  concentrations  used  for  the
ELISA’s were 20 ng/ml, 10 ng/ml, 4.37 ng/ml,1.87 ng/ml, 0.62ng/ml.
SPECIFICITY
This  assay  recognizes  human  BDNF.  No  significant  cross-reactivity  or
interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of human BDNF  is  typically  less  than 0.31
ng/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standard  5 x 0.5 ml
HRP-conjugate  1 x 6 ml
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
Standard  S1  S2  S3  S4  S5
Concentration
（ng/ml）
0.62  1.87  4.37  10  20 
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STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.
SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube （SST） and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 x g. Remove
serum and assay  immediay or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles. 
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  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 x g within 30 minutes
of collection. Assay immediay or aliquot and store samples at -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring all reagents and samples to room temperature before use. It is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Set a Blank well without any solution. Add 50µl of Standard or Sample
per well.  
2.  Add 50µl of HRP-Conjugate to each well （Not to Blank!）. Incubate for 1
hour at 37°C.
3.  Aspirate each well and wash,  repeating  the process  three  times  for a
total  of  three  washes. Wash  by  filling  each  well  with  ddH2O  （200µl）
using  a  squirt  bottle,  multi-channel  pipette,  manifold  dispenser  or
autowasher.  Complete  removal  of  liquid  at  each  step  is  essential  to
good  performance. After  the  last wash,  remove  any  remaining Wash
Buffer  by  aspirating  or  decanting.  Invert  the  plate  and  blot  it  against
clean paper towels.
4.  Add 50µl of Substrate A and 50µl Substrate B to each well. Incubate
for 15 minutes at 37°C. Keeping  the plate away  from  drafts and other
temperature fluctuations in the dark.
5.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing. 
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6.  Determine  the optical density of each well within 30 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and
subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve
by reducing the data using computer software capable of generating a four
parameter  logistic  （4-PL） curve-fit. As an alternative, construct a standard
curve  by  plotting  the mean  absorbance  for  each  standard  on  the  y-axis
against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the
points on  the graph. The data may be  linearized by plotting  the  log of  the
BDNF concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples and repeat the assay.
  Any  variation  in  operator,  pipetting  technique,  washing  technique,
incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can  cause  variation  in
binding. 
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  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Quantikine  Immunoassay,  the
possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS
  When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.
  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each standard  level, between sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period  following  the  addition  of wash  buffer,  and/or  rotating  the  plate
180 degrees between wash steps may improve assay precision.
  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary.
  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
  Stop Solution  should be added  to  the plate  in  the  same order as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the Stop Solution. Wells  that  are  green  in
color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the
Substrate Solution.
 
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人脑源性神经营养因子 人脑源性神经营养因子 人脑源性神经营养因子 人脑源性神经营养因子（BDNF）快速检测试剂盒 快速检测试剂盒 快速检测试剂盒 快速检测试剂盒
使用说明书 使用说明书 使用说明书 使用说明书
本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用
产品编号 产品编号 产品编号 产品编号：CSB-E04501h
检测范围 检测范围 检测范围 检测范围： ：： ：0.62 ng /ml -20 ng /ml
zui低检测限 zui低检测限 zui低检测限 zui低检测限： ：： ：0.31 ng/ml
特异性 特异性 特异性 特异性： ：： ：本试剂盒可同时检测天然或重组的 BDNF，且与其他相关蛋白基
本无交叉反应。
有效期 有效期 有效期 有效期：6 个月（2-8℃避光保存）
预期应用 预期应用 预期应用 预期应用： ：： ：ELISA法定量测定人血清，血浆及其它相关生物液体中 BDNF
含量。
说明 说明 说明 说明  
1.  浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。  
2.  刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实
验结果造成任何影响。
实验原理 实验原理 实验原理 实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法检测 BDNF含量。首先用 BDNF抗体包被微
孔板，制备成固相载体，然后加入样品（标准品与待测标本）同时加入酶标
记的 BDNF 抗体，特异性地形成固相抗体-抗原-酶标记抗体复合物，加底物
显色后在酶标仪测定吸光值（OD值），根据标准曲线计算出样品的含量。 
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试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制  
1.  酶联板 酶联板 酶联板 酶联板（Assay plate ）：                                                              一块 （96孔）。   
2.  标准品 标准品 标准品 标准品 （Standard）：                                                                     5×0.5ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
0.62ng/ml  1.87ng/ml  4.37ng/ml  10ng/ml  20ng/ml
3.  酶结合物 酶结合物 酶结合物 酶结合物（ （（ （HRP-conjugate） ）） ）：                                                      1×6ml/瓶。 
4.  显色剂 显色剂 显色剂 显色剂 A （ （（ （Substrate A）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
5.  显色剂 显色剂 显色剂 显色剂 B （ （（ （Substrate B）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
6.  终止液 终止液 终止液 终止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材
1.  标准规格酶标仪
2.  高速离心机
3.  电热恒温培养箱
4.  干净的试管和 Eppendof 管
5.  系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器
6.  蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存
1.  血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000 x g离心 20 分
钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻
融。
2.  血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° C
1000 x g离心 15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复
冻融。
注 注注 注： ：： ：以上标本置 以上标本置 以上标本置 以上标本置 4℃ ℃℃ ℃保存应小于 保存应小于 保存应小于 保存应小于 1 周 周周 周， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 1 个 个个 个
月 月月 月， ，， ，-80℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 2 个月 个月 个月 个月； ；； ；标本溶血会影响zui后检测结 标本溶血会影响zui后检测结 标本溶血会影响zui后检测结 标本溶血会影响zui后检测结果 果果 果， ，， ，因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检
测 测测 测。 。。 。 
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操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤
1.  将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时。
2.  将酶标板取出，设一个空白对照孔、不加任何液体；每个标准点依次各设
两孔，每孔加入相应标准品 50ul；其余每个检测孔直接加待测标本 50ul。   
3.  每孔加入酶结合物 50ul（空白对照孔除外），充分混匀，贴上不干胶封片，
置 37℃温育 1 小时。
4.  手工洗板，弃去孔内液体。去离子水注满各孔，静置 10 秒甩干，重复三
次后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
5.  每孔加显色剂 A 液 50µl，显色剂 B 液 50µl，振荡混匀后，37℃避光显色
15 分钟，每孔加终止液 50µl。
6.  用酶标仪读数，取波长 450nm，先用空白孔调零点，然后测定各孔 OD
值。
数据处理 数据处理 数据处理 数据处理
1.  手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的 0D值为纵
轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清 OD值找到对应的浓度
值。
2.  计算机：使用线性拟合功能，应将标准品 S1-S5 的浓度取对数（Log（浓
度））作为 X，将对应的 OD值减去空白对照孔 OD值后取对数（Log（OD
值-NSB））作为 Y，进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。
注意事项 注意事项 注意事项 注意事项
1.  从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及所需预包被板条应置室温
（18-25℃）平衡 30 分钟后方可使用，余者应及时封好口，放回 2-8℃中避
光保存，以备后用。
2.  使用前试剂应摇匀。
3.  结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。
4.  不同批号的试剂不可混用。
5.  加样时应注意避免所用各试剂及样品之间的交又污染。
6.  操作时，试剂盒内每种试剂各使用一个吸头，每一种标准品使用一个吸头，
每一个样品各使用一个吸头，吸头一次性使用。        
 

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