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Human Growth Hormone（HGH）
ELISA KIT
 
 
 
 
Catalog No. CSB-E04567h
（96T）
 
 
 
 
 
 
 
  This immunoassay kit allows for the in vitro quantitative determination of human
HGH concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
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INTRODUCTION
HGH  is  Human  Growth  Hormone,  a  natural  hormone  produced  in  the
pituitary gland of the brain. HGH is considered "the key" hormone because
it controls so many functions. It's responsible for youth, vitality, energy and
all  of  the  health  benefits  we  associate  with  youth.  Dr.  Daniel  Rudman's
study  in  the  New  England  Journal  Of  Medicine  demonstrated  the
remarkable ability to reverse the effects of aging upon the human body with
the  employment  of  HGH  -  Human  Growth  Hormone!  Due  in  part  to  his
efforts, Dr. Rudmans's study saw the effects of HGH upon overweight men
between the ages of 61 and 80 years of age.  
HGH reduces body fat The men did not alter their personal habits of eating,
smoking,  or  exercise,  yet  with  the  consumption  of  HGH,  they  lost  an
average of 14% of  their body  fat, while gaining an average of 8.8%  lean
muscle mass. Their skin became  firmer and  they experienced a  localized
increase in bone density. Over all, HgH appeared to reverse the effects of
aging by 10-20 years!!! HGH is prescribed and administered by a doctor in
the form of injections. But a nonprescription form is also available over the
counter and through mail order.  
HGH  promotes  growth  in  children  and  plays  an  important  role  in  adult
metabolism.  The  body  secretes  the  hormone,  in  decreasing  amounts,
throughout  our  lifetimes.  The  amount  of  hormone  in  the  body  can  be
measured by levels of IGF-1 （Insulin Growth Factor）. Growth hormone has 
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a profound effect on all the cells of the body, more than any other hormone
because it is the cell generator.  
HGH is the "master hormone" controlling many organs and body functions
and  is  directly  responsible  for  stimulating  tissue  repair,  cell  replacement,
brain  functions,  and  enzyme  function!  It’s  human  growth  hormone  that
grows the cells, bones, muscles, and organs, and it is the decreasing level
of human growth hormone after age 30 that slowly robs us of our "youth."  
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The microtiter plate provided in this kit has been pre-coated with biotin-BSA
and  Avidin.  Standards  or  samples  are  then  added  to  the  appropriate
microtiter plate wells with a biotin-conjugated HGH antibody and incubated.
Then  Horseradish  Peroxidase  （HRP）-conjugated  antibody  preparation
specific for HGH are added and incubated. Substrate solutions are added to
each well. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a
sulphuric  acid  solution  and  the  color  change  is  measured
spectrophotometrically  at  a  wavelength  of  450  nm  ±  2  nm.  The
concentration of HGH in the samples is then determined by comparing the
O.D. of the samples to the standard curve.
DETECTION RANGE
2.5 ng/ml-50 ng/ml. The standard curve concentrations used for the ELISA’s
were 50 ng/ml, 25ng/ml,10 ng/ml, 5 ng/ml，2.5 ng/ml. 
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SPECIFICITY
This  assay  recognizes  human  HGH.  No  significant  cross-reactivity  or
interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of human HGH is typically less than 1 ng/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero.
MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standards （S1-S4）  5x 1 ml
Biotin-antibody  1 x 6 ml
HRP-conjugate  1 x 10 ml
Wash Buffer      
1 x 20 ml
（10×concentrate）  
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
 
Standard  Standard1  Standard2  Standard3  Standard4  Standard5
Concentration
（ng/ml）
2.5  5  10  25  50 
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STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement.
REAGENT PREPARATION
Bring all reagents to room temperature before use.  
1.  Wash Buffer    If crystals have  formed  in  the concentrate, warm up  to
room  temperature  and  mix  gently  until  the  crystals  have  compley
dissolved. Dilute 20 ml of Wash Buffer Concentrate  into deionized or
distilled water to prepare 200 ml of Wash Buffer.
Precaution: The Stop Solution provided with  this kit  is an acid solution. Wear
eye, hand, face, and clothing protection when using this material.
OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer. 
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SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube （SST） and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 g. Remove
serum and assay  immediay or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of
collection. Assay  immediay  or  aliquot  and  store  samples  at  -20°C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring  all  reagents  and  samples  to  room  temperature  before  use.  It  is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Add  50µl  of  Standard  or  Sample  per  well.  Then  add  50µl  of
Biotin-antibody  to  each  well.  Standards  need  test  in  duplicate. Mix
well and then incubate for 30 min at 37°C.  
2.  Fill each well with Wash Buffer （about 200µl）, stay for 10 seconds and
Spinning.  Repeat  the  process  for  a  total  of  three  washes.  Complete
removal of  liquid at each step  is essential  to good performance. After
the  last  wash,  remove  any  remaining Wash  Buffer  by  aspirating  or
decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 
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3.  Add 50µl of HRP-conjugate to each well. Mix well and then incubate for
30 min at 37°C.  
4.  Wash the plate as before.
5.  Add 50µl of Substrate A and 50µl of Substrate B to each well, mix well.
Incubate for 15 minutes at 18-25°C. Keeping the pla te away from drafts
and other temperature fluctuations in the dark.
6.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
7.  Determine  the optical density of each well within 10 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average the duplicate readings for each standard, control, and sample and
subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve
by reducing the data using computer software capable of generating a four
parameter  logistic  （4-PL） curve-fit. As an alternative, construct a standard
curve  by  plotting  the mean  absorbance  for  each  standard  on  the  y-axis
against the concentration on the x-axis and draw a best fit curve through the
points on  the graph. The data may be  linearized by plotting  the  log of  the
HGH concentrations versus the log of the O.D. and the best fit line can be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor. 
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LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  It is important that the Calibrator Diluent selected for the standard curve
be consistent with the samples being assayed.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples with the appropriate Calibrator Diluent and repeat the assay.
  Any  variation  in  Standard  Diluent,  operator,  pipetting  technique,
washing  technique,  incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can
cause variation in binding.
  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Quantikine  Immunoassay,  the
possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS
  When mixing or reconstituting protein solutions, always avoid foaming.
  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each standard  level, between sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period  following  the  addition  of wash  buffer,  and/or  rotating  the  plate
180 degrees between wash steps may improve assay precision. 
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  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary.
  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
  Stop Solution  should be added  to  the plate  in  the  same order as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the Stop Solution. Wells  that  are  green  in
color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the
Substrate Solution.
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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人生长激素 人生长激素 人生长激素 人生长激素（GH）酶联免疫分析 酶联免疫分析 酶联免疫分析 酶联免疫分析
试剂盒使用说明书 试剂盒使用说明书 试剂盒使用说明书 试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用 本试剂盒仅供研究使用
产品编号 产品编号 产品编号 产品编号： ：： ：CSB-E04567h
检测范围 检测范围 检测范围 检测范围： ：： ：2.5 ng/ml – 50 ng/ml
zui低检测限 zui低检测限 zui低检测限 zui低检测限： ：： ：1 ng/ml
特异性 特异性 特异性 特异性： ：： ：本试剂盒可检测人 HGH，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期 有效期 有效期 有效期： ：： ：6 个月
预期应用 预期应用 预期应用 预期应用： ：： ：ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中 HGH
含量。
说明 说明 说明 说明  
1.  浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。  
2.  刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实
验结果造成任何影响。
实验原理 实验原理 实验原理 实验原理
用*化牛血清白蛋白和亲和素包被微孔板，制成固相载体，将已知
浓度的 HGH的标准品、标本加入微孔板中，使其与*标记的 HGH抗体
同时温育，洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的抗体，再经过温育和洗涤后
用底物显色。颜色的深浅和样品中的 HGH 的浓度成比例关系。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。   
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试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制 试剂盒组成及试剂配制  
1.  酶联板 酶联板 酶联板 酶联板（Assay plate ）：                                                              一块 （96孔）。   
2.  标准品 标准品 标准品 标准品（Standard）：                                                                      5×1ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
2.5 ng/ml  5 ng/ml  10ng/ml  25 ng/ml  50 ng/ml
3.  酶结合物 酶结合物 酶结合物 酶结合物（HRP-Conjugate）：                                                      1×10ml/瓶。 
4.  *抗体 *抗体 *抗体 *抗体（ （（ （Biotin-antibody） ）） ）                                                    1×6ml/瓶。 
5.  底物溶液 底物溶液 底物溶液 底物溶液 A （ （（ （Substrate A） ）） ）：                                                           1×7ml/瓶。 
6.  底物溶液 底物溶液 底物溶液 底物溶液 B （ （（ （Substrate B） ）） ）：                                                           1×7ml/瓶。   
7.  浓洗涤液 浓洗涤液 浓洗涤液 浓洗涤液 （ （（ （Wash Buffer1×20ml/瓶   使用时每瓶用蒸馏水溶解到 500ml。   
8.  终止液 终止液 终止液 终止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材 需要而未提供的试剂和器材
1.  标准规格酶标仪
2.  高速离心机
3.  电热恒温培养箱
4.  干净的试管和 Eppendof 管
5.  系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器
6.  蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存 标本的采集及保存  
1.  血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，
取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。  
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2.  血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2  -  8°C
1000 g离心 15 分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻
融。
注 注注 注： ：： ：以上标本置 以上标本置 以上标本置 以上标本置 4℃ ℃℃ ℃保存应小于 保存应小于 保存应小于 保存应小于 1 周 周周 周， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存 均应密封保存， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 1 个 个个 个
月 月月 月， ，， ，-80℃ ℃℃ ℃不应超过 不应超过 不应超过 不应超过 2 个月 个月 个月 个月； ；； ；标本溶 标本溶 标本溶 标本溶血会影响zui后检测结果 血会影响zui后检测结果 血会影响zui后检测结果 血会影响zui后检测结果， ，， ，因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检 因此溶血标本不宜进行检
测 测测 测。 。。 。
操作步骤 操作步骤 操作步骤 操作步骤
1.  将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时，取浓缩洗涤液，根据当批检
测数量，用蒸馏水上 1：10 稀释，混匀后备用。
2.  将酶标板取出，分别向孔中加入 50ul标准品、标本，再分别加入 50ul生
物素化抗体，震动 10-20 秒混匀，置 37℃孵育 30 分钟。
3.  手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复三次
后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
4.  每孔加入 100ul酶结合物，震动 10-20 秒混匀，置 37℃孵育 30 分钟。
5.  手工洗板，弃去孔内液体。洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复三次
后拍干；洗板机洗板，选择洗涤三次程序，洗板后拍干。
6.  每孔加显色剂 A 液 50µl，显色剂 B 液 50µl，振荡混匀后，18-25℃避光
显色 15 分钟，每孔加终止液 50µl。
7.  用酶标仪读数，取波长 450nm，先用空白孔调零点，然后测定各孔 OD
值。
数据处理 数据处理 数据处理 数据处理
1.  手工作图：用双对数坐标纸，以标准品浓度为横轴，以对应的 0D值为纵
轴，画出平滑曲线或直线，在曲线上按照待测血清 OD值找到对应的浓度
值。
2.  计算机：使用线性拟合功能，应将标准品 S1-S5 的浓度取对数（Log（浓
度））作为 X，将对应的 OD值减去空白对照孔 OD值后取对数（Log（OD
值-NSB））作为 Y，进行线性拟合。再从拟合线上计算出待测血清浓度。 
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注意事项 注意事项 注意事项 注意事项
1.  从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及所需预包被板条应置室温
（18-25℃）平衡 30 分钟后方可使用，余者应及时封好口，放回 2-8℃中避
光保存，以备后用。
2.  使用前试剂应摇匀。
3.  结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。
4.  不同批号的试剂不可混用。
5.  加样时应注意避免所用各试剂及样品之间的交又污染。
6.  操作时，试剂盒内每种试剂各使用一个吸头，每一种标准品使用一个吸头，
每一个样品各使用一个吸头，吸头一次性使用。
7.  每次测试必须重新制作标准曲线，上次实验标准曲线不可重复使用。     
 
 
 

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