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厦门慧嘉生物科技有限公司
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厦门慧嘉生物*经营人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒。诚信经营，价格实惠，服务周到，质量有保证。欢迎广告老师来询！: :
厦门慧嘉生物*经营ELISA试剂盒及Santa/Abcam抗体、Prospec细胞因子、Sigma/Amresco/Qiagen、Axygen耗材等生物试剂产品。实验为大，诚信经营，为客户提供“zui高质量的产品”和“的服务”。欢迎广大老师来询！: : 1048735792 或登陆http://www.biohj.com/（向客服人员索取原版说明书）
产品名称： 人封闭抗体（BA）ELISA Kit
产品英文： Human Blocking antibody,BA ELISA Kit
产品规格： 96T
产品类别： 人自身免疫类ELISA试剂盒[Human autoimmunity ELISA Kit]
人封闭抗体（BA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
特异性：本试剂盒可检测人封闭抗体（BA），且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中封闭抗体（BA）含量。
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不*之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 酶结合物（Conjugate）：2×6 ml/瓶。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：2×6 ml/瓶。
4. 阳性对照（Positive Control）：1×0.5ml/瓶。
5. 阴性对照（Negative Control）：1×0.5ml/瓶。
6. 底物溶液A（Substrate A）：1×7 ml/瓶。
7. 底物溶液B（Substrate B）：1×7 ml/瓶。
8. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
9. 终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶。
需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔，不加任何溶液；设阴性对照孔2孔，加阴性对照100μl；设阳性对照孔2孔，加阳性对照100μl；余孔加100μl*，然后直接加待测样本5μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置30分钟。
2. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
3. 每孔加酶结合物100μl（空白孔除外），充分混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃放置20分钟。
4. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液A和B各50μl，37℃避光显色10分钟。
6. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
7. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将*的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
1. 目测法：比临界对照显色深的样本为阳性，比临界对照显色相同或显色浅的为阴性。
2. 酶标仪测定：判断值（OD值）=阴性对照平均OD值×2.1，样品OD值大于判断值为阳性，小于等于为阴性。阴性对照平均OD值小于0.05时，按0.05计算。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
5. 在配制检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6. 底物请避光保存。
7. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
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