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技术文章

单纯疱疹Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡAb-IgM)检测

阅读:732发布时间:2010-11-10

[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 在微孔表面包被纯化的HSV抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在HSV—ⅡAb—IgM可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质,再加入酶联液,与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。zui后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中HSV—ⅡAb-IgM含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比,读出结果。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[试剂]
1.微孔板
2.样品稀释液
3.HRP-抗人IgM酶结合物
4.阴性对照
5.阳性对照
6.洗涤剂
7.TMB显色液
8.终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤)
1.吸取10ul血清标本加入250,ul标本稀释液中,做1:26稀释。
2.吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释),加入微孔板内,设空白对照l孔。振荡,混匀,去除孔内液体中气泡,室温环境中孵育20min。
3.弃去孔内液体,用洗涤液洗5次。
4.每孔再加入100iA酶联结合物,室温环境中孵育20min。
5.弃去孔中酶联液,用洗涤液洗5次。
6.每孔加入100ul TMB显色液,室温环境中孵育10min。
7.每孔加入100ul终止液,终止反应,充分混匀。
8.用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。
[注意事项]
1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。
2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3.试剂应保存于2—8℃冰箱,使用前应在室温环境中平衡30min。
4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上扣干。
5.血标本应分离出血清保存,2—8C可保存7d,冷冻保存可至6个月,避免反复冻融。
6.试剂在储存或使用过程中,禁止过热、
 


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