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戊型肝炎抗体IgG(HEVAb-IgG)检测

阅读:667发布时间:2010-11-17

[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 将戊型肝炎病毒(HEV)特异性抗原预包被于微孔反应板上,样品加入已有样品稀释液的反应孔中,在随后的温育过程中,若样品中含特异性抗体(HEVAb-IgG),则该抗体与包被抗原形成抗原—抗体复合物被吸附到微孔板上,再加入酶标记的第2抗体,zui终形成抗原—抗体—酶标记第2抗体复合物,洗涤除去未结合的游离酶,加入显色剂后显色。反之,若样品中不含特异性抗体(HEVAb-IgG),则加入显色剂后不显色。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[试剂]
1.包被反应板
2.样品稀释液
3.阴性对照
4.阳性对照
5.洗涤剂
6.酶标记第2抗体
7.显色剂A、B
8.终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1.用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液,每孔100u1。
2.将待测标本各10ul分别加入已有样品稀释液的各孔中,直接加阴性对照、阳性对照各100u1,设空白对照1孔。
3.充分混匀,37℃环境中温育20min。
4.倾去内容物,用洗涤液洗板5次,确保每次吸净无残留,全部洗完后在吸水纸上用力拍干。
5.各孔加入酶标记第2抗体100ul,振荡混匀。
6.倾去内容物,用洗涤液洗板5次,确保每次吸净无残留,全部洗完后在吸水纸上用力拍干。
7.每孔加入显色剂A、B各1滴,显色10rain。
8.终止显色后,在酶标仪上比色(波长为450nm),样品吸光度大于阴性对照2.1倍者为阳性。
[注意事项]
1.整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定,严防交叉污染。
2.所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
3.试剂应保存于2~8℃冰箱,使用前应在室温环境中平衡30min。
4.洗涤时各孔均应加满洗涤液,防止孔内有游离酶未洗净,每次洗板后均应在吸水纸上扣干。
[正常参考值] HEVAbqgG阴性
[临床意义] HEVAb-IgG阳性出现时间较HEVAb-IgM略晚,但持续时间相对较长,个别患者病愈14年后HEVAb-IgG仍为阳性。一般HEVAb—IgG于急性期含量较高,恢复期则明显下降,经过一定时期后,有相当比例患者的抗HEVAb-IgG消失,并非终身存在。因此,检测HEVAb-IgG并不能*反映人群既往感染水平。

 


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