自1967年以来，人们习惯把等电点聚焦简称电聚焦（isoelectrofocusing，IEF）。电聚焦电泳法是在一定抗对流介质（如凝胶）中加入两性电解质载体，直流电通过时便形成一个由阳极到阴极pH值逐步上升的梯度。这种梯度称为载体两性电解质pH梯度（carrierampholytepHgradient），若将缓冲基团变为凝胶介质的一部分，形成的pH梯度称固相pH梯度（immobilizedpHgradient，IPG）。两性化合物在此电泳过程中就被浓集在与其等电点相等的pH区域，从而使不同化合物能按其各自等电点得到分离。从分辨率看，采用固相pH梯度介质的效果较好。
鉴于电聚焦电泳法有浓缩效应、分辨率高、操作方便、设备简单和费时少等特点，它在蛋白质的等电点测定、纯度分析以及制备电泳纯样品等方面已得到较广泛的应用，但对于在等电点时发生沉淀或变性的样品却不适用。
（一）pH梯度的形成
若将pK和pI值各自相异却又相近的两性电解质溶液倾倒入电泳支持物中，当电流通过时，等电点zui小的两性电解质（pI1）在中性溶液介质中发生解离，带负电荷，向以硫酸为电极溶液的正极方向泳动。当它泳动到阳性端支持物时，与正极溶液电离出来的H+中和失去电荷，停止泳动，这时缓冲力大的载体两性电解质就使周围溶液的pH等于其等电点pI1。同理，等电点稍大的两性电解质（pI2）也向正极移动，当泳动到等电点zui小的两性电解质（pI1）阴时，就不能再向前泳动。如果穿过pI1区域，则pI2两性电解质带正电荷，反过来向阴极移动。所以该电解质一定位于pI1的阴。依此类推，经过适当时间的电泳后，pK和pI值各自相异却又相近的两性电解质将依等电点递增的次序在支持物中正极排向负极，彼此互相衔接，形成一个平滑稳定的由正极向负极逐渐上升的pH梯度。
（二）电聚焦分离蛋白质的过程
蛋白质是典型的两性电解质，它所带的电荷随着溶液酸碱度的变化而变化，即在酸性溶液中带正电荷，在碱性溶液中带负电荷。因此，蛋白质在外加电场作用下向正极，或向负极泳动。例如，当一个等电点为pIa的蛋白质置于从正极向负极逐渐递增的稳定平滑pH梯度支持物的阴时，因为处在碱性环境中带负电荷，故在电场作用下向正极移动，当泳动到pH值等于其pIa的区域时，泳动将停止。如果将此蛋白质放在阳，则带正电荷，向负极移动，zui后也会泳动到与其等电点相等的pH值区域。因此，无论把蛋白质放在支持物的哪个位置上，在电场作用下都会聚焦在pH＝pIa的地方，这种行为叫聚焦作用。同理，如将等电点分别为pI1，pI2……pIa的蛋白质混合物置于pH梯度支持物中，在电场作用下经过适当时间的电泳，其各组分将分别聚焦在支持物中pH值等于各自等电点的区域，形成一条一条的蛋白质区带，这既是等电聚焦分离蛋白质的过程，也是等电聚焦的基本原理。
