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技术文章

Northern杂交

阅读:4003发布时间:2010-12-18

Northern杂交是指将待测RNA样品经电泳分离后转移到固相支持物上,然后与标记的核酸探针进行固相液相杂交,用以检测RNA的方法。其原理和方法与Southern杂交基本相同。两者的区别主要在以下3个方面。

(一)检测对象
所检测的靶核酸是RNA。Northern杂交可用来对特异性mRNA定量以及确定其分子量。可以提取细胞总RNA直接电泳,用于mRNA和Northern分析,也可将mR—NA从总RNA中纯化出来,然后再电泳分离,用于Northern分析。RNA极易被环境中的RNA酶降解,因此在制备RNA样品时需要特别注意防止RNA被降解。所有器皿都要进行处理,尽可能除尽RNA酶。

(二)RNA电泳
RNA样品依其分子量大小在变性胶中进行分离,凝胶中需加入变性剂(如乙二醛、甲醛、甲基氢氧化汞),防止RNA分子形成二级结构(发夹结构),维持其单链线性状态。

(三)转膜
电泳结束后,Northern杂交不需要再进行变性和中和,直接采用毛细管虹吸法将胶中的RNA转移至膜上,也可采用电转移或真空转移法。

 


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