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上海源叶生物科技有限公司
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阅读:930发布时间:2011-1-12
荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)是一种定量免疫分析技术,其基本原理是荧光物质经单一平面的蓝偏振光(485nm)照射后,吸收光能跃入激发态,随后回复至基态,并发出单一平面的偏振荧光(525nm)。偏振荧光的强弱程度与荧光分子的大小呈正相关,与其(受激发时)转动的速度呈反相关。FPIAzui适宜检测小至中等分子物质,常用于药物、激素的测定。
FPIA采用竞争反应的原理,在缺乏未标记分析物(通常是待测样品)时荧光信号zui强;加入末标记分析物后,在已标记和未标记样品之间的竞争将减弱荧光信号。荧光信号强度与游离的分析物的浓度成正比,与待测样品中未标记分析物的浓度成反比。通过测定一系列已知浓度的标准晶,绘制竞争结合抑制标准曲线。经与标准反应曲线比较而得到定量值。以测定半抗原药物的浓度为例,反应系统内除待测药物外,同时加入一定量用荧光物质标记的相应药物(小分子),二者与有*的特异性抗体(大分子)竞争结合。当待测药物浓度高时,经过竞争,与大部分抗体结合,而标记药物则呈游离的小分子状态,因此在液相中转动速度较快,测得的偏振荧光强度也较低。反之,待测药物浓度低时,大部分标记药物与抗体结合,形成大分子的标记抗原抗体复合物,在液相中转动速度较慢,此时检测到的偏振荧光强度也较高。测定反应系统的偏振光大小,从标准曲线上就可地得知样品中待测药物的相应含量。
FPIA法的优点是灵敏度高,例如测定Digoxin的灵敏度可达0.2ng/m1,精密度高、速度快、操作简便,样品用量少,仪器不需要每日校准。缺点是仪器设备昂贵,药品试剂盒专属性强,需进口。
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