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技术文章

应用亲和素和*的ELISA

阅读:384发布时间:2011-1-15

亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取,分子量为60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个*分子紧密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素(strepavidin)。*(biotin)又称维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,*-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide ester,BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成*化的产物。亲和素与*的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个*分子的结合位点,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和*与ELISA耦联起来,就可大大提高其灵敏度。

亲和素*系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与*结合,通过亲和素*反应而使*化的抗体或抗原固相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且可使其结合点充分暴露。另外,在常规ELISA中的酶标记抗体也可用*化的抗体替代,然后连接亲和素与酶的结合物,以放大反应信号。桥联法(avidin biotin complex-ELISA,ABC-ELISA)与夹心法测抗原的过程见图。

 


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