对于该病的实验室诊断，传统的方法是进行病毒分离，然后用血凝和血凝抑制进行鉴定。尽管NDV只有一种血清型，但是不同毒株间的毒力差异很大。加上近年来新城疫弱毒活疫苗的广泛应用，仅从具有临床症状的病禽分离出病毒进行鉴定，还不能对ND作出确诊，因此需要对分离株的致病性进行评估，OIE根据*的病原毒力与病原分子结构间的关系建立的体外毒力鉴定技术，已经用于世界范围内新城疫病毒的调查。世界动物卫生组织（OIE）对报告ND暴发作丁下述定义：ND是由血清1型禽副黏病毒（APMV-1）引起的禽类感染，该APMV—1在毒力上符合下列两个标准中的一个：
①该病毒在1日龄雏鸡的脑内接种致病指数（1CPl）大于0.7；
②该病毒P1蛋白的N端（即117位残基）为苯*（F），而F2蛋白的C端有多个碱性氨基酸（直接测序或从核苷酸序列推导）。所谓多个碱性氨基酸是指在113位和116位之间至少有3个*或赖氨酸残基。不能显示上述氨基酸残基的特征结构则需要对分离的病毒作ICPl试验。
根据OIE对NDV的这一定义，目前OIE确诊ND有两种方法：
一是分离鉴定NDV并进行生物学试验，测定分离NDV的MDT、ICPt和IVPI以确定其毒力；
二是采用基于RT-PCR的分子生物学方法，确定病原为NDV并确定其毒力。
因常规的病毒分离鉴定和用生物学试验确定毒力费时、费力、费钱，又要使用动物，已越来越不被人们所接受。在这种情况下，经过几年探索而日趋成熟的分子确诊方法，可以用来取代常规的确诊方法。近年来，随着分子生物学和免疫学技术的快速发展，越来越多的快速诊断方法在新城疫的检测方面得到广泛的应用，如RT-PCR技术、荧光RT-PCR技术、EIASA技术和胶体金标记的诊断技术等。
