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上海源叶生物科技有限公司
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阅读:724发布时间:2011-4-6
目前用于分离PRRSV的细胞主要有如下几种:猪原代肺泡巨噬细胞(PAM)、CL2621细胞、MARC445(MA—104细胞系的克隆)。zui近又从MARC—145中克隆出更敏感的HS2H细胞用于PRRSV的分离。通常先将感染猪及流产、死产胎儿的肺及其淋巴结、肝、肾等组织匀浆,接种原代PAM或传代细胞系(如CL2621、MARCl45、HS2H等细胞),经传代后出现特异性CPE者,表明病毒分离阳性。研究发现,不同的病毒株适合生长在不同的细胞上,有的毒株仅生长在一种细胞上,有些则生长在多种细胞上,但大多数毒株均适应PAM,但用PAM所需成本高且难度较大(Wensvoort,et al,1991)。
PAM对PRRSV具有较高的敏感性,大多数毒株均可适应于该细胞,并且产毒量高。PAM可采用气管灌入法获得,用健康猪或SPF猪制备肺泡巨噬细胞。尽管可从许多组织当中分离到PRRSV,但血清和肺组织成功率zui高,尤其是血清采样较方便,因感染12~24h,便可在感染猪的血液中发现较高滴度的PRRSV,仔猪可持续8周,并且抗体有促进PRRSV在PAM中复制的作用(Yoon,et a1,1996;Kim,et a1,1993;Choi,et a1,1992)。但应用PAM会存在一些不足之处,猪肺存在未知微生物的污染,特别是支原体等病原微生物;较难获得均质的PAM,从而影响结果的可靠性;试验动物费用昂贵;制备PAM的技术难度大,因此应用受到一定的限制(Kim,etal,1993)。
从MAl04(猴肾细胞)中克隆出的MAR~145细胞对PRRSV具有高度的敏感性,可供多种毒株分离,其zui高病毒滴度达108.5TCID50/0.1lml,接种后48h出现明显的CPE变化,72h后细胞皱缩,脱落,接种4—5天后CPE发展迅速,80%一100%细胞产生CPC变化(Kim,etal,1993)。
在进行病毒分离的同时,还应结合相应的IFA和IPMA等方法进行检测,从而使结果更可靠(Wensvoort,etal,1991;Kim,et a1,1993;Baustista,et a1,1993a)。
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