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疯牛病IDEXXEIA检测方法

阅读:319发布时间:2011-7-6

本方法(IDEXX HerdChek BSE EIA test)由美国IDEXX公司开发研制,是一种快速简捷的酶联免疫测定方法,2004年通过美国和欧盟认证。

该方法的原理是将牛脑组织制成匀浆悬液,用稀释液处理组织悬液,将处理后的脑组织悬液加入到包被有能选择性地捕获PrPSc的化学聚合物(英国Microsens公司技术)的微孔板中,室温孵育,洗涤后加入辣根过氧化物酶标记的针对PrP分子保守区的单抗,TMB显色,测定OD值,判断结果。

本方法的敏感性为100%,特异性为99.99%。本方法的特点在于不需要蛋白酶K消化,无需离心,无需特别温度的孵育,所有步骤都在室温下进行,4.5h内出结果,无需丰富的实验经验,实验废物少,所需实验空间小。

疯牛病的IDEXXEIA检测方法主要步骤如下。

(1)样品准备 收集样品(脑闩部组织),匀浆,用稀释液稀释匀浆液。

(2)捕获PrPSc将稀释好的匀浆液加入到BSE病原捕获板中,由seprion亲和配体捕获。

(3)添加调节缓冲液 洗去捕获板中未结合的样品,加入调节缓冲液并孵育,使捕获的PrPSc变性,以便充分暴露抗原位点。

(4)添加HRP标记的单抗 洗去调节缓冲液,加入HRP标记的单抗并孵育。标记了HRP的PrP单抗结合上PrPSc。

(5)添加底物和终止液 洗去未结合的单抗,加入底物并孵育。当有阳性时出现蓝色,滴加HCl终止液终止反应,颜色则变成了黄色。

(6)读值和分析 用酶标仪读板,数值用IDEXXxChek软件分析。
 


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