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上海源叶生物科技有限公司
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阅读:1047发布时间:2010-7-1
电泳的高解析?使其成为生化技术中zui有效?的一门分析?器,以下简?说明各种电泳的形式及其应用。
a. ?连续胶体电泳 (disc-PAGE) 是以原态蛋白质进?电泳,一般用作纯?检定或活性分析,SDS-胶体电泳 (SDS-PAGE) 则用为次体分子?的测定,梯?(gradient) 电泳则可辅助原态蛋白质分子?的决定。 结合SDS及梯?两种特性的SDS-梯?胶体电泳,其解析?zui高。
b. 电泳形式 早期使用圆柱?胶体,演变成直?式的平板胶片 (16×18 cm),zui后改成迷你电泳胶片 (8×10 cm),电泳时间只约一小时,而其解析??变。现在柱?胶体电泳只用在等电焦集法,以进?二次元电泳;而大型平板电泳则多用在制备式电泳,一般电泳大多以迷你胶片进?的。
c. 胶体材质 的种类很多,但用在蛋白质者则以聚丙烯酰胺 (polyacrylamide) 为主;聚丙烯酰胺电泳是蛋白质应用zui广的电泳分析方式。也有少数使用洋菜胶体 (agarose gel),多用在测定pI较广的异构酶酶群。
d. 泳动?: 在pH 8.8 的电泳条件下,大部分pI 小于8.8 的分子均能往正极泳动;蛋白质的泳动?与所带电荷成正比,而与其分子?成反比;?分子?一样,但形?越?规则,或体积越松散者,泳动?越小。
e. 聚丙烯酰胺电泳 虽然分有原态的disc-及变性的SDS-PAGE 两种,但两者除?SDS-PAGE 在整个系统含有0.1% SDS 的外,其余*相同,且其铸胶及电泳方法均属大同小异。
f. 原态disc-PAGE 中的样本蛋白质,因电泳系统中?含界面活性剂SDS,其活性多能保持,可以在胶体上做活性染色。 ?目标酶没有方?的活性染色法,则可把胶体一片一片切下,做每一片胶体的活性测定。
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