细菌质体需藉由转形 （transformation） 的技术，将的引介入细菌体中，藉由寄主细菌的系统?达成复制或进?基因表现的目的。寄主细菌的选择，须视质体的种类及实验的目的而定。本实验的目的在建构一个表现质体，使的能在大肠杆菌中大?表现 GUS。
然而，?用大肠杆菌进?外源基因的表现时，常遇到的问题是，外源基因的产物会对寄主细菌造成伤害；此外，持续?断的表现外源基因也会使寄主细菌生长减慢或无法生长。因此，必须有适当的调控机制?控制外源基因的表现。 我们所用的载体pQE31 在T5 promoter与外源基因插入地址的间，具有一段lac operon中的lacO序?，可?用lac repressor结合其上?调控T5 promoter的启动，只有在inducer （?如IPTG） 加入时，才会启动转录的进?，而lac repressor的?源则必须靠寄主提供。由于此质体为multiple copies，一般大肠杆菌菌株中lac repressor的含??足以有效地进?调控，纵使未加入inducer，也会有外源蛋白质的表现，万一外源蛋白质对寄主造成毒害，使的无法生长，我们可能?表现质体?无法选殖到，?无法达成我们的实验目的?。 我们所选用的寄主菌株JM109 所具有的 lacIq，能够过?表现 （overproduce） lac repressor，因此可较有效地控制T5 promoter的启动。 然而，?是?JM109 这一类带有lacIq的菌株?发生问题时，就必须再?换其它的寄主菌株；?如M15[pREP4]，此菌株除?染色体上的lacI基因外，还带有能持续表现lacrepressor的质体，应可解决lac repressor ??足的问题。
检定载体上是否接上外?的DNA 片段，常因质体?同而有?同方法，一般常?用外?DNA 片段的插入导致载体某表现形的丧失 （insertional inactivation） ?作为筛选的依据；或者可?用插入的DNA 上带有宿主所缺少的表现型进?筛选。?载体与插入DNA 皆无适当的筛选依据，则可将菌?中的质体抽出后，以限制酶作用后进?电泳分析。而我们实验中所用的质体pQE31，并没有简?快速筛选重组质体的方法可用，因此需要?用GUS 的抗体进?colony hybridization，寻找可表现出GUS的转形株；或在培养基中加入GUS 的基质，转形株?可表现出GUS，则可将基质分解使菌?呈现蓝色；或以质体快速抽取法，筛选带有正确分子?质体的转形株。 三种方法?请练习，得到的正反应株均必须再抽取质体进?限制酶分析，以进一步确认质体的正确性。
