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公司动态

gⅥ-cDNA噬菌粒文库小规模的获取和纯化

阅读:726发布时间:2010-7-26

[器材和试剂]
●通用设备及试剂以及以下的设备和试剂:
●无菌96孔带盖培养板(Costar)
●LBAT
●R408辅助噬菌体(Stratagene)
●振荡孵育箱
●96孔复制板
●PEG/NaCl(
●PBS

[方法]
1.将克隆体接种到100ul LBAT 96孔培养板上,并在37℃过夜振荡培养(180r/min)。
2.使用96孔复制板将其接种到装有200ul LBAT的第二块96孔培养板上,在37℃培养直到生长中期(大约1,5小时)。
3.在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408辅助噬菌体。
4.37℃无振荡培养30分钟。
5.37℃过夜振荡培养。
6.4℃800g离心20分钟,收集细胞。
7.将上清液转移到一新的96孔培养板上,并加40pul PEG/NaCl。
8.将板放置于冰上1小时。
9.4℃800g离心20分钟,收集噬菌体颗粒,小心除去上清液,在50ulPBS溶液中打散颗粒。

 


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