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公司动态

利用血清筛选噬菌体文库的筛选

阅读:448发布时间:2010-8-2

[器材和试剂]
● PBBST(PBS,0.1%BSA,0.1%Tween-20)
● 磁分离仪(Dynal)
● f1Rl紫外灭活噬菌体
● 洗脱缓冲液(用*将0.1mol/L HCl调整到pH 2.2,1mg/mlBSA)
● 2rn01/L Tris-HCl pH 9.0
● LB-琼脂培养基(1%细菌用胰蛋白胨,0.5%酵母提取物,1.5%细菌用琼脂,0.17Trl01/L NaCl,pH 7.2)
● LB-琼脂培养基+Amp/X-gal/IPTG[LB-琼脂培养基,50/xg/m1*,35ug/ml X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚β-D-半乳糖苷),35p.g/m11PTG(异丙基硫代半乳糖苷)]

[方法]
1.将已包被的磁珠转移到Eppendorf管中,加入50ul血清样品PBBST液,zui后定容至1m1。4℃转轮孵育12~16小时。
2.在4℃下,用PBBST洗涤磁珠4次,每次30分钟;每次洗涤10ml。
3.再次将磁珠悬浮在PBBST中, 内含1×1013个UV灭活nRl,终体积为1ml。4℃置于转轮上3~4小时。
4.在上述混合物中加入2X10”个文库噬菌体颗粒,4℃温和搅动12~16小时。
5.在4℃下,用10m1PBBST洗涤磁珠6~7次,除去未连接的噬菌体;每次洗涤后,用磁分离仪除去液体。
6.室温下,用0.5ml洗脱缓冲液温和搅动孵育磁珠30分钟,洗脱结合噬菌体。
7.将洗脱产物转移到一个Eppendorf管中,再加入50ul的2rll01/L Tris-HCl,pH 9.0,中和。
8.在LB-琼脂培养基+Amp/X-gal/IPTG平板上,按转导单位(TU)滴定洗脱噬菌体(A)和未吸附噬菌体(N)。

 


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