制备好DNA文库后，用标准方法将DNA电转人大肠杆菌中，得到转化株并保存，然后制备噬菌体用于分析和筛选。在液体培养基中将转化后的细胞进一步培养到对数生长期。经过在液体培养基中的增殖，一些菌液用于甘油保种，剩下的用于制备噬菌体。或者可以通过将整个转化体系铺在含有选择性抗生素的琼脂平板上，而直接从固体培养基上得到转化株。相信这个方法可以在保险性储存的过程中，阻止一些特殊克隆的优势生长。
电转化和噬菌粒文库的储存，甘油保种的制备以及筛选所需的噬菌体的制备
[器材和试剂]
● 2TY/Carb/Tet琼脂平板 （31g/L2TY，15g/L琼脂，100/lg/m1羧苄*和10ug/ml四环素）：取31g 2TY、15g琼脂，加水至1L，然后高压灭菌。待溶液冷却至40℃，然后加入lml羧苄*（100mg/m1）和1ml四环素（10mg/m1），充分混匀后铺于皮氏培养皿中。
● 大肠杆菌电感受态细胞；如XLl—Blue的电感受态细胞（Stratagene）
● 将DNA电转进大肠杆菌的试剂和设备
● 2TY和2TY/G1u培养基（含有或不含2％葡萄糖的31 g/L的2TY培养基）：将31g 2TY加入1 L水中，搅拌溶液让2TY溶解后灭菌，待溶液冷却，取100m1分装入一个无菌的锥形瓶中，并加入10m1 20％（w/v）的葡萄糖（过滤灭菌）。
● 10mg/m1的四环素：溶于超纯水后过滤灭菌
● 100mg/m1的羧苄*：溶于超纯水后过滤灭菌
● 100mg/m1的*：溶于超纯水后过滤灭菌
● 无菌的-50％的甘油水溶液
● *抗性的VCS—M13辅助噬菌体储液（1010pfu/m1）（Stratagene）
● PEG-NaCl溶液：20％PEG，2．5mol/l NaCl
● 磷酸盐缓冲液（PBS） （2 mm01/L NaH2P04，16mmol/L Na2HP04，150mm01/L NaCl，pH 7．4～7．6）：将8g NaCl、0．2g KCl、1．44g Na2HPO4和0．24g NaH2PO4溶于800m1去离子水中，用盐酸调节pH至7．4，然后加水至1L。
● DNA文库
● Oakridge 型 40m1 离，乙，管 （Nalge Nuno）
● Sorvall RC 5Cplus型离心机及SS—34型转子，或其替代物
[方法]
1，取10/Il得自实验方案8．2中步骤6的混合物， 电转入大肠杆菌的dut+ung+型菌株 （如XLl—B1ue） 中。大文库容量的文库可能需要多次电转化。在我们对泛素系统的研究工作中，我们将文库电转入购自Strat agene的XLl—Blue电感受态细胞。可以替换的菌株包括SS320或TGl。
2．将电转后细胞的适当稀释液铺于2TY/Carb/Tet0琼脂平板中， 以测定转化株的数量。随后可以使用平板上的菌落，通过PCR、限制性酶酶切及测序，来检验文库。
3．在250ml的锥形瓶内，将电转后的菌液（得自步骤1）加入到40m1含有12ul 100mg/ml的羧苄*和20/A1 10mg/ml的四环素的2TY/Glu培养基中。
4．将菌液在37℃振荡培养至对数生长期，直到OD600＝0．5，这通常需要4—5个小时。l小时后将12ul 100mg/ml的羧苄*20ul 10mg/ml的四环素①加入到锥形瓶中。
5．取出4m1菌液，加入1．5ml 50％的甘油，每管1m1分装后于-80℃储存。
6．将4ml VCSMl3辅助噬菌体（约1010pfu/ml）加入到剩余的菌液中，以使噬菌体与大肠杆菌之比达到10倍左右。将锥形瓶子37℃静置15～30分钟。
7．将l/4的菌液（约10ml），分别加入到4个含有100ml 2TY/Glu培养基、75ul 1100mg/ml的羧苄*和100ul 10mg/ml的四环素的250m1锥形瓶中。将锥形瓶于37℃振荡培养，直到菌液开始轻微变浑（约2小时）。
8．加入70ul 100mg/ml的*，并于37℃振荡培养过夜。
9．第二天上午，将每份过夜培养的菌液各自分装入3只Oakridge离心管中，在Sorvall RC 5C plis型离心机中使用SS—34转子， 于4℃12000 r/min离心15分钟。
10．从每只离心管中取出30ml上清液，并与7．5ml PEG—NaCl溶液混合，以沉淀噬菌体颗粒。将这些离心管于冰上放置1小时，偶尔混匀液体。
11．如步骤9中所述，于12000r/min离心15分钟，吸出并弃去上清液。
12．将噬菌体沉淀重悬于PBS中，每管1ml。将重悬后的噬菌体转移至新的小离心管中，开用小型离心机于10000r/min离心，除去不溶性的残渣。将干净的上清液转移至新的小离心管中并于4℃保存。
