[器材和试剂]
● 塑料加样槽（reagent reservoir Costar）
● 96孔板（“非黏性”的Nunc F型微孔板，或者聚丙烯微孔板）
● HRP联结的抗M13抗体（Stratagene）
● TMB底物试剂盒（Pierce）
● 2mol/L硫酸溶液
● CBB
● 微型振荡器（Bellco）
● 酶标仪
[方法]
1．如实验方案5．1所述，将靶标蛋白进行两倍梯度稀释（例如16ug/m1、8ug/m1、4ug/ ml、2ug/ml、1ug/ml、0．5ug/m1、0．25ug/ml）后包被Maxisorp微孔板。A排中加 入zui高的浓度，从B排到G排浓度依次降低。A排不要加入靶标溶液，以作为对照来测定噬菌体非特异性的结合。
2．在单独的一个非黏性微孔板中，将噬菌体在CBB中进行两倍梯度稀释，使得第1道中 噬菌体浓度zui高，第2道至第12道浓度依次降低。
3．倒出并控干步骤l中包被过的微孔板中的洗涤缓冲液，将100ul稀释后的噬菌体溶液直 接加入固定了靶标的微孔板。
4．将微孔板盖好，在室温下放置60分钟。
5．吸去微孔板内溶液，洗涤12次。
6．加入用CBB稀释2000倍后HRP联结的抗M13抗体，每孔100ul，在室温下反应20分钟。吸去板内液体，洗涤8次，倒出并控干洗涤缓冲液。
7．加入100/11 TMB显色液（预先在室温下平衡），在微型振荡器上避光充分振荡10分钟。
8．立即加入100ul 2mol/L的硫酸溶液终止显色反应，充分振荡30秒后用酶标仪读取4SOnm处（A450）的吸光度值。
