1．定义 分子量为65kD和67kD的两个异构体GAD被称作GAD65和GAD67，由各自的基因编码，在氨基酸水平上有65％的同源性和80％的相似性，zui大差异位于NGAD67端110个氨基酸处（图5-9）。酶的激活需要在C末端附近结合5，磷酸化的吡哆醛辅因子，GAD65作为脱辅基酶存在，GAD67作为结合P-5-P的全酶存在。
2．组织来源 大脑中GAD含量zui高，其次为胰岛郎罕细胞，大脑垂体、性腺、肾、肾上腺和肝内。在1型糖尿病中GAD作为一种自身抗原已被广泛研究。在人、大鼠和小鼠的胰腺胰岛中其表达形式不同，在蛋白质水平，人胰岛仅含GAD65，大鼠胰岛两种形式都存在』、鼠胰岛中GAD67占绝大多数，且表达量较大鼠低。原位杂交显示GAD65和GAD67基因表达在大鼠（可能也包括小鼠）中于胰岛日细胞，而在人胰岛中却缺乏明确的定位。在mRNA水平，人胰岛GAD65和GAD的比率是200；1，大鼠两种形式都具有，小鼠中GAD67占优势。GAD蛋白在数代小鼠p细胞株中可检测到，包括猿病毒40（SV40）感染的β细胞株β-TC3和pHC，于TC3细胞株表达两种GADmRNAs，GAD65更丰富些。GAD67 mRNA在SV40转化的非肥胖型糖尿病鼠β细胞株NIT-1表达，不表达于大鼠胰岛瘤细胞株RINm5F和sr40转化的大田鼠胰岛细胞株HIT中。
3．重组GAD及抗原表位：由E。coli表达系统表达的重组GAD往往缺乏酶促活性，可能由于不正确的折叠造成。真核宿主（如杆状病毒感染s{9昆虫细胞的载体）可合成大量有酶促活性、免疫反应性的GAD。虽然1型糖尿病血清与天然的和重组的GAD发生反应概率相似，但在抗体结合上有差异。例如，GAD65特异性单克隆抗体可以免疫沉淀脑组织来源的GAD65和GAD67，但仅沉淀重组的GAD65。组织提取物中的异二聚体形式可引起两种GAD的共沉淀。
在SMS和1型糖尿病中识别GAD的抗体形式明显不同。通常，在蛋白质印迹法（免疫印迹法）中，SMS患者血清中的抗体与变性的GAD反应，而1型糖尿病患者血清中的抗体通过免疫沉淀法仅识别天然形式的GAD。另外，SMS患者的GAD抗体可与GAD65和GAD67反应，而不到20％的1型糖尿病血清与GAD67发生免疫沉淀反应，且SMS患者抗体的滴度较l型糖尿病者的高。
SMS和1型糖尿病中GAD65抗体表位的概要，GAD抗体由于存在立体构型和分子中不同区域共同构成，表位非常复杂。
4．纯化方法 天然GAD的纯化可通过凝胶过滤和DEAE-Sephadex层析或者采用GAD单克隆抗体的亲和层析柱，仅需一步即可纯化GAD。在杆状病毒sr9细胞系统中表达的重组GAD，用阴离子交换层析或免疫亲和层析纯化，重组GAD由于其C末端带有多聚*，容易通过镍螯合物的亲和层析而纯化。目前已有商品化纯化的GAD供应。
