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基因组DNA提取常见问题及解决方案
点击次数：1371 发布时间：2010-10-16
基因组DNA提取常见问题及解决方案
1 没有或获得的DNA量很少
A 确保DNA Wash Buffer中是否加入要求量的无水乙醇
B 样品裂解不充分
建议：加大裂解缓冲液的量或减少样品的量；将组织材料充分研磨或匀浆；需要蛋白酶K消化的样品，增加蛋白酶K的用量，或者延长蛋白酶K的消化时间，并将组织尽可能的减碎。
C 吸附不充分
建议：上柱前，请确保裂解混合液中加入适量的无水乙醇。
D DNA洗脱不当
建议：洗脱液较少时，应加在膜的中间；采用ddH2O洗脱时，应保证pH值在7.0-8.5；样品量较少时，若洗脱体积过大，会相应降低DNA的浓度
E 样品中DNA含量少
如果样品中本身DNA含量少，应加大初始材料的量，并相应的增加各种缓冲液的量。
2 柱子堵塞，或者膜上颜色残留
A 样品过多
建议：减少样品的使用量，或者增加裂解缓冲液的量
B 样品裂解不充分，使用了过多的样品，或者样品没有研磨充分
建议：减少样品的使用量，充分研磨样品或者增加裂解液用量
C 裂解后，吸取上清时，带入杂质
建议：离心后，小心吸取上清，避免吸起沉淀，如有沉淀吸起，再次离心后吸取上清。
3 OD260/OD280偏低
A 蛋白质残留
建议：离心后，吸取上清时，应尽量避免吸起沉淀
B 用ddH2O洗脱DNA时，因为pH和离子浓度的影响，OD比值可能会偏低，但是并不代表纯度低。
C OD260/OD280偏高
A 有RNA残留
建议：检查RNase A是否加入，或者RNase A活性下降。
5 不能顺利用于后续酶反应实验
A 乙醇残留
建议：在洗脱前，将吸附柱开盖再次离心，以*去除残留的乙醇。