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猪繁殖与呼吸综合征病毒分离
点击次数：641 发布时间：2010-11-25
目前用于分离PRRSV的细胞主要有如下几种：猪原代肺泡巨噬细胞（PAM）、CL2621细胞、MARC445（MA—104细胞系的克隆）。zui近又从MARC—145中克隆出更敏感的HS2H细胞用于PRRSV的分离。通常先将感染猪及流产、死产胎儿的肺及其淋巴结、肝、肾等组织匀浆，接种原代PAM或传代细胞系（如CL2621、MARCl45、HS2H等细胞），经传代后出现特异性CPE者，表明病毒分离阳性。研究发现，不同的病毒株适合生长在不同的细胞上，有的毒株仅生长在一种细胞上，有些则生长在多种细胞上，但大多数毒株均适应PAM，但用PAM所需成本高且难度较大（Wensvoort，et al，1991）。
PAM对PRRSV具有较高的敏感性，大多数毒株均可适应于该细胞，并且产毒量高。PAM可采用气管灌入法获得，用健康猪或SPF猪制备肺泡巨噬细胞。尽管可从许多组织当中分离到PRRSV，但血清和肺组织成功率zui高，尤其是血清采样较方便，因感染12～24h，便可在感染猪的血液中发现较高滴度的PRRSV，仔猪可持续8周，并且抗体有促进PRRSV在PAM中复制的作用（Yoon，et a1，1996；Kim，et a1，1993；Choi，et a1，1992）。但应用PAM会存在一些不足之处，猪肺存在未知微生物的污染，特别是支原体等病原微生物；较难获得均质的PAM，从而影响结果的可靠性；试验动物费用昂贵；制备PAM的技术难度大，因此应用受到一定的限制（Kim，etal，1993）。
从MAl04（猴肾细胞）中克隆出的MAR~145细胞对PRRSV具有高度的敏感性，可供多种毒株分离，其zui高病毒滴度达108.5TCID50/0.1lml，接种后48h出现明显的CPE变化，72h后细胞皱缩，脱落，接种4—5天后CPE发展迅速，80％一100％细胞产生CPC变化（Kim，etal，1993）。
在进行病毒分离的同时，还应结合相应的IFA和IPMA等方法进行检测，从而使结果更可靠（Wensvoort，etal，1991；Kim，et a1，1993；Baustista，et a1，1993a）。