MSN交谈
您所在位置：产品搜索
请输入产品关键字：
联系方式
技术文章
抗原与抗体—微珠基质的结合
点击次数：552 发布时间：2010-11-29
有多种不同的方法可使抗原有效地结合到免疫亲和柱上。因为抗体是通过共价与微珠偶联，而不是在溶液中，抗体—微珠／抗原作用完成所需的时间比抗体和抗原二者以游离状态在溶液中所需的时间要长得多。因此，采用的方法应使抗原交连的抗体达到zui大程度的结合。推荐使用两种结合方法：将抗原溶液加入呈糊状的抗体—微珠内不断混和均匀；或将抗原溶液流经抗体—微珠层析柱，保持抗原与抗体尽可能长时间的接触。如没有别的问题，应首先选择在抗体—微珠柱内结合。若是结果不够理想，可以试用在溶液中结合的方法。先用几支小型层析柱测试*结合和收集抗原的条件。
1．亲和力
虽然抗体对抗原的亲和力可以计算，但对大多数工作来说，决定性的标准是抗体是否可以将抗原从溶液中定量地分离出来。zui简单的方法是建立一个小规模的反应，测试zui初洗涤液中抗原的含量。如果抗体—微珠基质在l一2h内不能分离大多数抗原，在实验设计时做一些变动，可能会有些帮助。使微珠上偶联较多的抗体或增加微珠的用量抑或延长结合时间，可以使结合的抗原量增加。但这些条件会增加非特异性本底，所以一般应综合考虑获得高产量和低本底的条件，另一方面，使用高亲和力的抗体可以解决有效收集抗原的问题。其次使用稀释的溶液，相对较低的浓度和较短的结合时间，这些条件都可使本底降低。
2．滴定
作为测定的*个步骤，先确定所需柱基质与结合给定量抗原的比值。方法与免疫沉淀法相同。将等体积的抗体—微珠基质加到含不同浓度抗原的样本中，糊状物在4C混合1h，以后过程同标准免疫沉淀试验。这样就可以得出关于收集所需抗原必要的分离柱基质体积的估计量。如果从结合反应的上清液中测得抗原，也可以测定被除去的无关抗原量。