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技术文章
HA和HI试验诊断禽流感
点击次数：1858 发布时间：2011-1-4
常用于AIV亚型的鉴定。
血凝素（HA）是由3条糖基化多肽分子以非共价形式聚合而成的三聚体，其C末端有一疏水区插入病毒囊膜的双层脂质膜中，是与病毒囊膜的结合部位。N末端有一疏水区，具有膜融合活性，对病毒侵入宿主细胞是必须的。HA能与多种动物（如鸡、豚鼠）和人的虹细胞表面的糖蛋白受体相结合，引起红细胞凝集，若在病毒与细胞混合前先加抗血凝素抗体，使该抗体首先与病毒血凝素结合，当再加入红细胞时，由于病毒血凝集上结合的抗体的阻断作用，血凝素就不能再与红细胞上的受体结合，红细胞就不出现凝集，这种现象称为血凝抑制。血凝和血凝抑制是病毒学研究常用的检测指标。一般情况下，新分离毒株要先鉴定出特异性NP或MP抗原型（用AGP）确定禽流感病毒，再做HA亚型的鉴定。
现已有人采用改进HA法-HA加敏法，即使Ag、Ab在4℃或室温下作用1～2h后，再加入l％鸡红细胞。该法测抗体效价比常规法高2-4倍，若抗原用乙醚裂解，其敏感性比常规法高4～6倍，但观察时间以在30min内为好，否则易出现假阳性。另外，在进行HI试验时，应先除去非特异性凝集反应。许多禽类血清都含有非特异性血凝抑制因子，能与红细胞表面受体竞争性地作用于病毒表面的血凝素而发生非特异性凝集反应。通常用受体破坏酶（RED）即霍乱菌培养液处理法或高碘酸钠法制备血清。
HA、HI法特异性好，是亚型鉴定的常用方法，但其操作过程烦琐费时，并且由于用已知HA亚型的抗血清不能检出新的HA亚型的禽流感病毒。所以用该方法鉴定不如琼脂扩散实验简便和快捷。