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技术文章
副溶血性弧菌食物中毒诊断技术
点击次数：802 发布时间：2011-1-6
（一）检验方法
1．样品采集
以无菌方法采取具代表性的样品，置灭菌的容器内。一般采集患者粪便、呕吐物和中毒的可疑原因食品。常见可疑的食品有鱼、虾、蟹、贝等海产品及其他有关的食品。若上述食品均为煮熟品，也可检验它们的包装物、烹调用具等。
副溶血弧菌不宜在低温环境中生存，故采集到的样品应尽快送往实验室，不宜冷冻保存运送，以免影响检验结果。
2．分离培养
副溶血弧菌营养要求不高，普通培养基、蛋白胨水中均可生长。在含盐3．5％的培养基上生长良好，o．5％盐时可生长，12％以上及无盐的培养基中不能生长。发育温度为30-37~C，以37~C*。生长的pH范围是7．0-9．5，zui适pH为7．7～8．0，需氧性强，厌氧生长很缓慢。多数菌株于肉汤、蛋白胨水等培养基中呈浑浊表面形成菌膜。R型菌发生沉淀。厌氧培养48h以上，才见生长。固体培养基上菌落常呈圆形隆起，不透明，表面光滑、湿润，多数菌株继代后，呈不正圆。粗糙型菌落，灰白半透明或不透明，在EMB琼脂上不生长。某些菌株在麦康凯培养基上不生长；生长者，其菌落为圆形、平坦、半透明或浑浊略带红色。从腹泻病例初次分离到的菌落多较典型一般不形成色素。食品中分离到的菌株，多为R型。胆酸盐稍有阻止该菌扩散的作用，血平板上可见溶血环。在氯化钠蔗糖平板上菌落呈绿色。S．S琼脂上菌落中等大，无色透明、扁平、有动性，不易被接种环挑起。 该菌对乙酸，90％以上菌株对0／129抑制弧幕衔?2，4-二氨基-6，7-二异丙基喋啶）敏感。该菌的溶血作用是因其具有耐热性溶血素，这种溶血素是相对分子质量约为42000的酸性蛋白质，对心脏有毒性，是一种即时型致死毒。
（二）动物试验
经上述试验符合副溶血性弧菌的菌株接种于3．5％NaCl蛋白胨水中，经16-18h培养后，小鼠腹腔注射0．3ml，观察2-3天。小鼠症状为竖毛，不活泼，食欲不振，腹部贴饲养罐底，呼吸困难，步态蹒跚有时呈痉挛性跳动、四肢抽搐及尾部痉挛性振动，多于24-48h内死亡，将死亡小鼠作剖检与分离培养。
（三）患者血清凝集试验
从患者分离的S型菌株，接种于3．5％食盐的琼脂斜面，37~C培养24h，以无菌生理盐水洗下稀释成每毫升含菌10亿个的菌液沸水煮1h，加入o．5％*即成O抗原。将其与患者血清作试管凝集试验：血清稀释为（1；：10）～（1；640），于37~C过夜，观察。凝集价在（1：80）一（1：160）为阳性，1；40为可疑。通常发病10天后凝集价开始下降。
（四） KP溶血试验
副溶血性弧菌临床分离株绝大部分都能产生耐热直接溶血毒素（thermostable direct hemolysin，TDH），并能在鲜血平板上产生一种特殊的溶血现象，叫做神奈川现象（kanawaga phenomenen，KP）。该试验需经过前增菌、选择性增菌、选择性培养后，挑取可疑菌落接种到鲜血平板上，置于37℃孵箱中过夜，如菌苔周围出现透明溶血环，即为KP阳性，据此诊断样本中含有Vp。该试验是检测副溶血性弧菌zui基本的方法：，能把绝大部分副溶血性弧菌检测出来，但操作烦琐、所需时间长（约4天），而且存在部分TDH-株，易漏检，给人们健康带来危害。