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技术文章
免疫组化 免疫胶体金 免疫荧光检测猪繁殖与呼吸综合征
点击次数：520 发布时间：2011-2-15
①免疫组织化学技术。这是诊断该病较可靠的方法之一，可用于检测PRRSV抗原的分布。Halbu，等（1994，1995）报道了检测病猪肺脏内的PRRSV抗原的亲和素-*-免疫过氧化物酶方法；经鼻内接种105.8TCID50ATCCVR-2386毒株于4头3周龄不喂初乳的仔猪，感染后第4天或第9天扑杀，并应用建立的免疫组化技术检测人工，结果肺，心、扁桃体、脾、淋巴结、胸腺组织检测为PRRSV抗原阳性。Pol等（1991）使用免疫过氧化物酶染色检测人工鼻内接种6日龄SPF仔猪的肺、脾组织的冰冻切片，结果抗原呈阳性。
②免疫胶体金技术（DIGFA）。Mager等（1993）使用特异性单抗SDOW-17建立了检测PRRSV抗原的免疫金银染色方法（1GSS），用106.2TCID50LHVA-92-1和104.6TCID50LHVA-92-2PRRSV毒株分别进行鼻内人工接种3周龄的仔猪，人工感染后第6天或第8天扑杀，结果在酒精固定、福尔马林固定及冷冻保存的肺脏组织中检测到PRRSV抗原，在感染后第4天、第6天、第8天用酒精固定的扁桃体、淋巴结、胸腺、肾脏等组织中检测到抗原。
③免疫荧光抗体染色技术。Benfield等（1992）制备了针对PRRSV核衣壳蛋白的单克隆抗体，这种单抗能与北美洲和欧洲的45株分离株反应，表明这种单抗是针对这些分离株的保守抗原决定簇。应用异硫氰酸荧光素（FITC）标记，建立了免疫荧光抗体染色技术用于直接检测仔猪肺组织中的抗原。有的直接采集小猪的肺泡巨噬细胞（PAM）进行培养，用病毒特异性荧光抗体进行诊断。
以上几种病原检测方法有的需要细胞培养，工作量大，周期长，有的需要做组织切片甚至荧光显微镜，不利于基层检测单位推广应用，因此在诊断上很少应用。