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技术文章
RT-PCR法诊断猪瘟
点击次数：509 发布时间：2011-2-15
谢志勤等根据已发表的猪瘟病毒正2基因（囊膜糖蛋白gP55基因）序列，设计合成了一对特异性引物，扩增片段的大小为507bp，用RT-PCR技术对石门系标准株和10株分离株进行检测。结果这对引物对标准株和10株分离株均能扩增出与预期大小相符507bp的RT-PCR产物，而对其他6种猪病病原核酸的扩增结果则为阴性。
李春阳等根据所有报道的猪瘟病毒（HCV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的序列设计了3条引物，通过多重PCR反应，同时从含有HCV和BVDV核酸的样品中扩增出各自的特异性条带。
Shih-TunglAu（1991）从CSFV感染组织中分离总RNA，用AMV反转录酶进行反转录，产生的cDNA再用Taq酶和CSFV特异性引物进行扩增，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测，灵敏性可达10‘TCID5。，再用套式引物扩增后，灵敏性可提高1000倍。WiRz（1993）从基因组的高保守区域合成引物对，进行RT-PCR扩增，与组织培养和免疫荧光染色相比，RTPCR可以更快地区分猪瘟病毒。Claudio等设计了多重RT-PCR对猪瘟病毒、边界病毒（BDV）和牛腹泻病毒（BVDV）等进行扩增，猪瘟的目的片段为200bp，BDV和BVDV扩增出260bp的目的片段，从而鉴别诊断猪瘟病毒。优点：特异性较强，可确诊。缺点：成本较高。