血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂盒产品说明书

最近更新时间：2010-12-11

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点击次数：8 发布时间：2010-11-27 22:25:55

血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂盒产品说明书 GMS50137.3 v.A
主要用途
GENMED血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂是一种旨在运用3-羟-3-甲戊二酰*作为底物，在还原酶的催化下，还原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光谱法来测定血液样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物或人体血液样品（血清、血浆、红细胞等）或纯化酶样品3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶的活性检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
甲戊二羟酸通路（mevalonate pathway），又称为3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶通路或甲戊二羟酸依赖性通路，是所有高等真核生物和许多细菌具有的重要的细胞代谢通路，用于体内产生二甲基丙烯焦磷酸（dimethylallyl pyrophosphate；DMAPP）和异戊二烯焦磷酸（isopentenyl pyrophosphate；IPP）作为生物大分子合成的基础，包括蛋白质异戊二烯化、细胞膜维护、激素合成、蛋白固着、蛋白糖化等。3-羟-3-甲戊二酰*还原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase；HMGR；EC1.1.1.34）是控制甲戊二羟酸通路的关键的酶，调节*和类异戊二烯脂分子的产生。HMG-COA还原酶位于内质网膜上，含有8个跨膜结构域，其中活性结构域在细胞浆里。HMG-COA还原酶是许多降脂药物的靶标，包括lovastatin （Mevacor）、atorvastatin （Lipitor）、pravastatin（Pravachol）和simvastatin（Zocor）。在HMG-COA还原酶的催化下，将4个电子的3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原为甲戊二羟酸（mevalonate），同时产生还原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADPH）被氧化为氧化型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP），其氧化后的吸光峰值变化（340nm 波长），来定量分析3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶的活性。3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶反应系统为：
产品内容
GENMED缓冲液（Reagent A） 毫升
GENMED反应液（Reagent B） 微升
GENMED底物液（Reagent C） 微升
GENMED阴性液（Reagent D） 微升
产品说明书 1份
保存方式
1
保存GENMED缓冲液（Reagent A）、GENMED反应液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；GENMED反应液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）避免光照；有效保证6月
用户自备
抗凝管：用于血液样品采集的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于样品制备
比色皿或酶标板：用于光谱分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于光谱分析
实验步骤
一、 样品准备
选择一：血浆样品
1． 准备好抗凝管
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管（注意：避免使用溶血样品）
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
7． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
选择三：红细胞样品
1． 准备好抗凝管
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000 RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心抽去上层黄色液体 （注意：避免触碰白色液体层）
5． 小心移取500微升管底红细胞到新的1.5毫升离心管（注意：避免触碰上面白色液体层）
6． 加入500微升预冷的无离子水
7． 涡旋震荡15秒
8． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－
2
GMS30030.1）
9． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
二、 测定准备
1． 开启并设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长340nm，间隔5分钟，读数2次（共10分钟），并置零
2． 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；GENMED反应液（Reagent B）和GENMED底物液（Reagent C）避免光照
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 在37℃温度下孵育3分钟
6． 加入xx微升GENMED阴性液（Reagent D）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（0分钟读数－10分钟读数）
四、 样品测定
1． 移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升GENMED反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 在37℃温度下孵育3分钟
6． 加入20微升待测样品（500微克蛋白）（注意：样品须清澈）
7． 上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）
8． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（0分钟读数－10分钟读数）
五、计算样品活性
[（样品读数－背景读数）X样品稀释倍数X （分钟）]＝单位/毫升÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝单位/毫克
单位＝微摩尔NADPH /分钟
六、 酶标板测定
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升GENMED缓冲液（Reagent A）到96孔板中
3． 分别加入xx微升GENMED反应液（Reagent B）
3
4． 分别加入xx微升GENMED底物液（Reagent C）
5． 轻轻摇动96孔酶标板
6． 在37℃温度下孵育3分钟
7． 分别加入xx微升GENMED阴性液（Reagent D）或待测样品（500微克蛋白）到相应孔中（注意：样品须清澈）
8． 轻轻摇动酶标板
9． 即刻放进酶标仪检测：0分钟读数和10分钟读数
10．活性计算：
单位＝微摩尔长NADPH /分钟
注意事项
1． 本产品为20次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，背景测定只需1次
4． 建议使用比色皿测定
5． 样品须澄清，至关重要
6． 加样后3秒内光谱测定
7． 测定值由高到低变化；测定持续10分钟
8． 光谱测定后，比色皿须清洗*
9． 样本测定0分钟读数高于10分钟读数表明具有酶活性
10．如果10分钟读数高于0分钟读数，表明样本没有活性或检测不到
11．建议待测样本蛋白浓度为500微克/20微升（本公司提供 GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1）
12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13．通常细胞3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶活性很低，为皮摩尔级，吸光读数差值微小
14．如果样本干扰较大，建议使用GENMED血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶活性比色法定量检测试剂盒-GMS50358.3
15．3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶单位活性定义为：在37℃，pH 7.5条件下，每分钟内氧化1纳摩尔还原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）所需的酶量作为一个活性单位
16．本公司提供系列甲戊二羟酸（MEVALONATE）通路分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，
4
保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
GMS50137.3 GENMED血液3-羟-3-甲戊二酰*还原酶光谱法定量检测试剂盒 20次
GMS50137.3A GENMED缓冲液（Reagent A） 5毫升
GMS50137.3B GENMED反应液（Reagent B） 5毫升
GMS50137.3C GENMED底物液（Reagent C） 5毫升
GMS50137.3D GENMED阴性液（Reagent D） 5毫升
试剂盒订购信息
产品编号
名称
规格
GMS50137.1
细胞3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂盒
20次
GMS50137.2
组织3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂盒
20次
GMS50137.3
血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶光谱法定量检测试剂盒
20次
GMS50358.1
细胞3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶活性比色法定量检测试剂盒
20次
GMS50358.2
组织3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶活性比色法定量检测试剂盒
20次
GMS50358.3
血液3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶活性比色法定量检测试剂盒
20次
GMS10187
3-羟-3-甲戊二酰*（HMG-COA）还原酶待测样品制备试剂盒
20次

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