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质体DNA 酵解反应与洋菜胶体电泳分析
点击次数：453 发布时间：2011-12-21
本实验以BamHI 与HindIII 酵解pBlueGus，并以洋菜电泳分析产物。
仪器用具：微?离心机;37℃恒温水槽;Mupid II 迷你电泳槽及铸胶器;UV transilluminator;防护面罩;拍?得相机
药品试剂：
质体pBlueGus DNA ;限制酶BamHI 与HindIII （Roche）;10×Reaction buffer 2 （Roche）;10×Reaction buffer 3 （Roche）;Agarose;1×TAE 电泳缓冲液;DNA分子?标记 （??DNA/HindIII 或100 bp ladder, 0.5 μg/mL）;10×追踪染剂 （0.25% bromophenol blue; 0.25% xylene cyanol; 0.1 M EDTA;50% glycerol）;Ethidium bromide （500 μg/mL）;拍?得667 底片
方法步骤：
1） 取两支1.5 mL微?离心管，分别标示为 #1 与 #2 的后，依下表所?顺序，
逐一加入酵解反应所需各项物质 （体积单位为 μL）。注意：应等所有成份?加?的后，再加入限制酶。
2） 以手指头轻弹微?离心管，以?均匀混合管中各项物质。
3） 离心数秒后，放置于37℃恒温水槽作用1~2 h。
4） 请?用这一段时间参照『基本操作技术』所描述的步骤准备一片1.2%洋菜胶体。
?? Ethidium bromide 是强?致癌物质，严禁戴着手套到处?摸！
5） 自恒温水槽取出微?离心管，离心数秒后暂存冰中备用。
6） 拟进?电泳分析时，请拿出3 支1.5 mL 微?离心管，分别标示为 #1, #2与 #3，并依下表所示在各离心管逐一加入适?的DNA 与10×追踪染剂（体积单位为 μL）。
7） 把胶片移至电泳槽，注入适?电泳缓冲液，以微?移液器P20 逐一将样本
吸入注出数次使混合均匀，并小心注入胶片的样本槽中。
8） 接好电极线以定电压100 V 进?电泳，待追踪染剂移动至胶体三分的二处时，关闭电源，将胶体移至UV transilluminator box，以拍?得相机拍照 。
?? DNA泳动方向为 （-） 向 （+）。 此外，在UV transilluminator box上直接观察DNA色带时，没戴眼镜的同学应戴上护目镜或面罩，以避免UV灼伤；含有ethidium bromide的洋菜胶体请丢至容器中！