48T*IgMELISA检测试剂盒-技术文章-上海酶联生物研究所

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48T*IgMELISA检测试剂盒

阅读：561发布时间：2014-2-10

本试剂仅供研究使用标本：细胞培养上清液

试验原理：

IgM试剂盒是间接法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IgM浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IgM和*标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，*IgMELISA检测试剂盒然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IgM的浓度呈比例关系。

自备材料

蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
保存------如果样品不立即使用，*IgMELISA检测试剂盒应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结果判断 与分析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的IgM标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的IgM含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-8.0g/L

4、敏感度： 0.01 g/L

大鼠金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒 Rat Metallothionein,MT ELISA Kit Y35226 96T/48T
大鼠心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)ELISA试剂盒 Rat cardiac isoform of Tropnin T,cTnT ELISA Kit Y35227 96T/48T
大鼠乙酰*酯酶(AChE)ELISA试剂盒 Rat Acetylcholinesterase,AChE ELISA Kit Y35228 96T/48T
大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒 Rat carbohydrate-deficient transferrin,CDT ELISA Kit Y35229 96T/48T
大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒 Rat Total bile acide,TBA ELISA Kit Y35230 96T/48T
大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒 Rat β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA Kit Y35231 96T/48T
大鼠*结合蛋白(RBP)ELISA试剂盒 Rat Retinol-binding protein,RBP ELISA Kit Y35232 96T/48T
大鼠*释放激素受体抗体(GNRHR-Ab)ELISA试剂盒 Rat anti-gonadotropin-releasing hormone receptor antibody,GNRHR-Ab ELISA Kit Y35233 96T/48T
大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA试剂盒 Rat von Willebrand Factor cleaving protease,ADAMTS-13/vWF-cp ELISA Kit Y35234 96T/48T
大鼠主要碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒 Rat major basic protein,MBP ELISA Kit Y35235 96T/48T
大鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒 Rat eosinophil cationic protein,ECP ELISA Kit Y35236 96T/48T
大鼠钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒 Rat calcineurin,CaN ELISA Kit Y35237 96T/48T
大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒 Rat Inhibin binding protein,INHBP ELISA Kit Y35238 96T/48T
大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)ELISA试剂盒 Rat anti-Thyroid-Peroxidase antibody,TPO-Ab ELISA Kit Y35239 96T/48T
大鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA试剂盒 Rat apoptosis inducing factor,AIF ELISA Kit Y35240 96T/48T
大鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA试剂盒 Rat anti-double stranded DNA,dsDNA ELISA Kit Y35241 96T/48T
大鼠碱性磷酸酶(ALP)ELISA试剂盒 Rat alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit Y35242 96T/48T
大鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒 Rat Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA Kit Y35243 96T/48T
大鼠脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒 Rat lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Kit Y35244 96T/48T
大鼠乙醇脱氢酶(ADH)ELISA试剂盒 Rat alcohol dehydrogenase,ADH ELISA Kit Y35245 96T/48T
大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)ELISA试剂盒 Rat aldehyde dehydrogenase,ALDH ELISA Kit Y35246 96T/48T
大鼠可溶性CD14(sCD14)ELISA试剂盒 Rat soluble cluster of differentiation 14,sCD14 ELISA Kit Y35247 96T/48T
大鼠缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)ELISA试剂盒 Rat Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian *IgMELISA检测试剂盒hormone,MIS/AMH ELISA Kit Y35248 96T/48T
大鼠雄激素(androgen)ELISA试剂盒 Rat androgen ELISA Kit Y35249 96T/48T

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