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上海酶联生物研究所
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阅读：3431发布时间：2010-10-14
使用多价展示还是单价展示的选择与载体类型的选择有关。带有噬菌体正常启动子的普通噬菌体载体一般会形成多价展示，除非被展示蛋白被大量酶解。另外，用于其中的噬菌粒载体通常仍然会是多价展示的，因此pⅧ展示的约2700个拷贝中只有一小部分是融合蛋白。另一方面，使用能在一个弱（或非诱导性）启动子的调控下将蛋白展示在pⅢ蛋白上的噬菌粒载体上，通常会导致被称为“单价展示”的结果。
了解单价展示的本质是很重要的。从含有pⅢ噬菌粒展示载体的并用辅助噬菌体感染过的大肠杆菌中制备噬菌体颗粒，一个典型的制备产物会出现呈泊松分布的融合蛋白的表达：10％或更少的颗粒会展示一个拷贝的融合蛋白；展示两个拷贝的比例则非常小；而剩下的大部分颗粒只会展示野生型的pⅢ蛋白。所以，大部分展示性种类是单价的，但大部分颗粒*五展示。
由于对区别具有不同亲和性的结合物能力的影响，展示的价位是zui重要的。早期工作显示，多价展示会无法鉴定出筛选中亲和性zui高的克隆，因为多价位会使弱结合性克隆具有高表观亲和性（亲和力）。单价展示可以保证基于单纯亲和性的筛选，因而一毁被用于很多以从文库中鉴定出结合zui紧密的变异体为目的的研究。反过来，在一些初始候选者的结合性非常低的应用中（如与一个给定靶标结合的多肽的从头筛选），多价位增加了分离出的及弱结合性的克隆的机会。在这样的项目中，一个常用的实验策略就是以多价展示开始，然后当被展示多肽的亲和性成熟时，转为单价展示。
大量用于噬菌粒制备的不同辅助噬菌体已经被开发出来，并可以从商业途径得到。一般而言，它们可以被交替使用。它们全被都含有能降低包装效率的突变（以确保噬菌粒基因组被优先包装），以及含有能保证对细菌（含有带Ff复制起始位点的噬菌粒）进行有效感染的突变M13K07及其衍生物VCSMl3带有*抗性基因，使得对被辅助噬菌体感染过的细菌抗生素的筛选得以进行。
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