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上海酶联生物研究所
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阅读：896发布时间：2011-8-12
特异性抗体免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞
用包被特异性抗体或抗IgG抗体的免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞的方法。
可以在几分钟内从复杂的原代细胞混合物中分离出很高纯度的目的原代细胞。
用包被特异性抗体或抗IgG抗体可以分离出非常纯的原代细胞群体，而且有*的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同，原代细胞的纯度可达95%-99.9%。 ?
基本原理：
已包被用包被特异性抗体磁珠与原代细胞表面相应分子特异性结合，或者抗IgG抗体磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的特异性抗体结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞分离。
基本分类：
免疫磁珠法分为阳性细胞分离法和阴性细胞法：
阳性细胞分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞。
阴性细胞分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于上清液的细胞为所需细胞。
一般而言，阴性细胞分离法比阳性细胞分离法的磁珠用量大。
基本步骤：
1、离心收集待分离细胞，用少量E孵育液（0.5％A、0.08％EDTA PH7.2 ，真空抽滤除菌及液体内气体）充分混悬细胞（0.5ml/1×108细胞），包被特异性抗体磁珠或抗IgG抗体，4°C孵育30分钟。
2、用20倍体积E洗细胞一次，再加E（0.3ml/1×108细胞）充分混悬细胞后，加入相应二抗包被的超微磁珠，混匀后置8～15°C孵育10～15分钟。
3、将分离柱安装入磁场中，加入0.5ml E，在重力作用下自然流尽，以预处理分离柱。
建议：
1、分离细胞全过程在超净台中完成。
2、超微磁珠及微小磁场系统适合于106-107细胞分离。
3、分离柱一般只能一次应用。
4、尽量去除死细胞。
5、细胞悬液加入分离柱中时，应将滴管伸至底壁后加入，避免将细胞悬液沿管壁流入。
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