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上海酶联生物研究所
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阅读：418发布时间：2011-06-01
上海酶联生物研究所
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使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中极低密度脂蛋白（VLDL）含量。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
| 120μg/ml | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 60μg/ml | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 30μg/ml | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 15μg/ml | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
| 7.5μg/ml | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
1.准备试剂，样品和标准品
2.加入准备好的样品和标准品，
3.洗板5次，加入酶标试剂，
4.洗板5次，加入显色液A、B，
5.加入终止液
6.15分钟之内度OD值
7.计算
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
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