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上海酶联生物研究所
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阅读：695发布时间：2010-05-31
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如何地转染胚胎干细胞？
Bio-Rad公司近日在其上发布了一篇技术指南，是由美国得克萨斯大学健康科学中心的Eva Zsigmond撰写的，讲述的是如何利用Gene Pulser Mxcell电穿孔系统转染小鼠和人的胚胎干细胞。
此技术指南（编号为5904）研究了电穿孔参数的优化，以更地将DNA导入小鼠胚胎干细胞和人胚胎干细胞，这些细胞是在克隆形成和无滋养层的条件下生长的。
电穿孔是将基因导入小鼠胚胎干细胞的理想方法。使用已经确立的电穿孔参数，小鼠ES细胞能够率地稳定转染，在多能性和核型稳定性方面没有不良影响。然而，与小鼠胚胎干细胞相比，人胚胎干细胞在电穿孔后存活率和转染效率都要低一些。
目前关于电穿孔人胚胎干细胞的文献不多，且大部分方法都是针对特定的细胞系或基因座，很难推广到所有干细胞。于是，Zsigmond的研究小组想要优化电穿孔参数，将DNA导入无滋养层条件下的ES细胞。
与其它系统相比，Bio-Rad的Gene Pulser Mxcell电穿孔系统的主要优势在于除了目前的程序，每个关键参数都是可编程的，从电压到脉冲次数，让研究人员能够找到特定细胞的条件，包括难转染的原代细胞和干细胞。此外，该系统是96孔板形式，能筛选不同的电穿孔条件。
Gene Pulser Mxcell电穿孔系统采用开放的架构，允许Zsigmond的研究小组确定小鼠及人胚胎干细胞转染的*步骤，同时优化细胞存活率。研究人员保持DNA浓度恒定，细胞密度相近，采用不同的电压（250 V和300 V）以及不同的电容参数（100 μF、200 μF、300 μF和950 μF）来检测转染效率和存活率。
研究表明，电容在200 μF时，细胞存活率和GFP表达都为zui有利的水平，而低电压（250 V）时的存活率略高于高电压。研究人员鉴定出人ES细胞的*电穿孔条件为电压250 V，电容 200 μF，电阻 1000 Ω及指数波形。不过这些结果还需要进一步的验证。
研究人员认为电穿孔是将DNA导入细胞的简单且有效的方法，且实验中针对无滋养层的ES细胞的电穿孔条件可能对未来的临床应用很重要。
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