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上海酶联生物研究所
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阅读：328发布时间：2012-11-9
在发育和干细胞生物学、癌症研究和药物开发中，测定细胞的增殖能力是一种基本方法。Life Technologies推出了一系列产品，可准确地测定细胞在整个细胞周期中的进程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor为单个细胞或细胞群体中的细胞周期进程提供了准确、灵敏的读数。而Click-iT® EdU assay则能检测进入DNA合成期的细胞，并将S期的细胞与其他细胞区分开来。研究细胞周期
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor是基于两个细胞周期调控蛋白geminin和Cdt1，它们分别与绿色和红色荧光蛋白相融合。Cdt1和geminin蛋白的降解是时间上调控的，这样G1期只存在Cdt1，G1/S期存在两种蛋白，而S、G2和M期只存在geminin。
因此，细胞核的荧光就从红色（G1）变成绿色（S、G2、M），为监控细胞周期进程提供了一种简单的方法。FUCCI系统是基于BacMam 2.0技术，它利用杆状病毒来实现哺乳动物细胞的转导和瞬时表达。BacMam 2.0大大提高了这种基因导入平台的效率和实用性。过去与BacMam 1.0不兼容的细胞类型（神经元），或转导效果不佳（一些干细胞、CHO）的细胞类型，现在也能通过简单的一步过程定量转导。BacMam 2.0融合了新元件，大大增强了转导效率和表达水平，故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor实现了细胞周期进程和细胞分裂的活细胞成像，它也与固定和透化处理兼容。这种细胞周期传感器是即用型的，操作过程也很简单——只需将Premo™ FUCCI试剂加入您的细胞，孵育过夜，并利用荧光显微镜或流式细胞仪观察即可。
Click-iT® EdU assay则是我们常用的BrdU分析的替代。在DNA合成过程中，核苷类似物EdU（5-乙炔-2’-脱氧尿苷）掺入新生的DNA链中。EdU不是通过抗体检测，而是基于一个click反应——铜催化的叠氮化物和炔烃之间的共价反应。EdU核苷中含有炔烃，而Alexa Fluor或Pacific Blue荧光基团上含有叠氮化物。利用成像技术、流式细胞术或高内涵分析即可判定群体中S期细胞的比例。Click-iT® EdU标记的一个主要优势在于荧光叠氮化物（分子量<~1,000）的体积远小于BrdU抗体（分子量~150,000），这样EdU可在温和条件下掺入，保留了抗原完整性，从而实现了下游的抗体分析。与BrdU检测需要苛刻条件不同，Click-iT®检测试剂只需要标准的固定和透化即可。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor让细胞周期分析可在活细胞中开展，它与延迟成像结合时特别有用。对于固定细胞的成像，Click-iT® EdU标记实现了温和条件下掺入EdU的检测
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