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阅读:145发布时间:2015-7-22
其他名称:T细胞生长因子(T cell growth factor,TCRF)
定义:主要由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子。是所有T细胞亚群的生长因子,并可促进活化B细胞增殖,故为调控免疫应答的重要因子,也参与抗体反应、造血和肿瘤监视。
【中文名称】: 白细胞介素-2
【简写拼音】: BXBJS-2
【英文名称】: Interleukin-2
【所属类别】: 免疫增强剂||其他抗肿瘤药及辅助治疗药
【别名】 白间素, 欣吉尔, T细胞生长因子 ,白细胞介素-2
【外文名】Interleukin-2 ,IL-2
【适应症】 白介素-2是一个分子量为14500的糖蛋白,它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖。重组白介素-2可用于临床研究。主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效(Rossenberg)。LAK细胞代表1个有单核巨噬细胞,B和T淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些LAK细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外,LAK细胞(不象T细胞)介导杀伤不受MHC的约束。[1]
1 材料和方法:
1.1 制备粗制IL-2无菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按1∶1将血液稀释,然后重层于菲可液面上,以1 500r/min离心30min,取白细胞层,用RPMI1640洗2次,按1~3×10细胞/ml浓度加入10%胎牛血清RPMI1640,注入一装有磁棒的大瓶中,置37℃搅拌培养4天,取出,分装于50ml离心管中,1 500r/min离心20min,弃上清液,将细胞悬浮于1%胎牛血清RPMI1640培养液中,使细胞浓度为106细胞/ml。同时加入纯质PHA1~2μg/ml以及多种B淋巴母细胞株,使其浓度为106细胞/ml,37℃搅拌培养18~24h后,取出以1500r/min离心30min,取上清,用045μg滤膜过滤除菌,滤液即为粗制IL-2。
2 制备精品IL2
2.1 硫酸铵沉淀与真空浓缩透析:在4℃下将硫酸铵粉末按50%饱和量加入上述粗制IL-2中,搅拌2h,12000g离心30min,取上清液,再加入80%饱和硫酸铵,4℃过夜,次日以12000g离心30min,弃上清液,将沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中,置真空负压浓缩*中透析浓缩至所需容量。
2.2 Sephadex G100凝胶过滤:用2×180cm的过滤柱及PBS(同上),以80ml/h流速过滤。将各管洗脱液用紫外分光光度计280nm检测其OD值。同时将几种不同分子量的标准蛋白也用相同条件过滤及检测其OD值,绘出IL-2及标准蛋白OD值的曲线。将各管洗脱液过滤除菌后,作白细胞生物活性试验,按试验结果绘出曲线,找出具有zui高IL2活性的几管洗脱液,混合后,作下一步精制。
2.3 BlueSepharose层析:将上述混合后的洗脱液加入BlueSepharose柱中,流速约15ml/h,按每管10ml收集流出液,当样品全部流出柱中以后,用上述PBS洗涤样品柱,再用梯度NaCl溶液(从0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脱,按2ml/管收集洗脱液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器调节控制。洗脱完毕后,作各管OD值及NaCl浓度的测定。各管洗脱液过滤除菌后,作出生物活性测定。将峰值前后的数管洗脱液混合,即为精制的IL2。置-20℃冰箱保存。
3 检定
3.1 活性测定用10%胎牛血清RPMI1640将上述IL2稀释为50%、25%、125%、625%,而后再将每个百分浓度以及100%浓度的IL2倍比稀释,自1∶2至1∶128,将每个稀释度分别加入多孔板的孔中,每孔01ml。然后取CT6细胞株(小鼠的IL2依赖性T细胞株),调整浓度为106细胞/ml,每孔加入01ml,同时用培养基代替IL2作对照。将多孔板培养24h后,取出按每孔1μci的浓度加H3标记胸腺嘧啶核苷继续培养4h。取出后用MESHⅡ细胞收集器过滤洗涤细胞,用β计数器测定各孔细胞的cpm。必要时按此结果绘出曲线,确定活性单位。
3.2 蛋白含量测定采用分光光度计,分别测得OD280及OD260,然后按下式计算:蛋白含量(mg/ml)=(144×OD280-075×OD260)×稀释倍数
3.3 毒性试验及细菌检查参考*制备部分。
应用
【药理作用】 本品可促进T淋巴细胞增殖与分化,诱导具有细胞毒样活力的杀伤细胞,诱导及增强杀伤性T细胞、单核细胞、巨噬细胞的活力等。
【临床应用】 适用于慢性活动性乙型肝炎病毒感染等
【用法用量】 静脉滴注:每次2.5万-5万U,每日1次。
【不良反应】 常见发热、寒战等反应。1.消化系统:恶心、呕吐、腹泻、结肠局部坏死或穿孔。 2.呼吸系统:可致间质性肺水肿、呼吸性碱中毒。3.神经系统:可发生行为变化、认知障碍。4.心血管系统:可出现低血压、心动过速、心律失常等症状。5.血液系统:可出现中性粒细胞上升,淋巴及单核细胞下降。6.泌尿系统:出现少尿、体液潴留、氨质血症。可出现内分泌功能紊乱,血钙、血磷下降,*缺乏。
【规格】 粉针剂:1000u,10000u, 10万u, 100万u.
注意事项:癫痫、严重低血压,心、肾功能不全,高热者禁用。孕妇、患有心脏病或肺部疾病、60岁以上者慎用。用药期间应定期查肝、肾功能。
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