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ELISA检测试剂盒的技术原理应如何理解?

阅读:626发布时间:2016-4-22

江莱生物是国内免疫学产品主要供应商之一,提供各种进口、国产ELISA检测试剂盒,质优价廉.有着丰富服务经验和深厚专业背景的团队为您提供技术服务和支持,有任何试剂盒方面的问题都能帮您解决,免除您的后顾之忧。让您的实验省时省力,更好的为您服务。

 

ELISA检测试剂盒技术原理:
   (1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
   (2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
   (3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
   (4). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。
   (5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
   (6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

 

标本的采集及保存
1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请zui后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。


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