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348次本试剂仅供研究使用 标本:血清或血浆
试验原理:
sVCAM-1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).人可溶性血管间黏附分子ELISA检测试剂盒已知sVCAM-1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将sVCAM-1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中sVCAM-1的浓度呈比例关系。
自备材料
蒸馏水。
加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。人可溶性血管间黏附分子ELISA检测试剂盒使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的sVCAM-1标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的sVCAM-1含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-80ng/ml
4、敏感度: 0.1 ng/ml
小鼠高迁移率族蛋白1(HMGB1) Mouse mobility group box-1 protein ELISA Kit Y08244 96T/48T
小鼠妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A) Mouse pregnancy associated plasma protein-A ELISA Kit Y08245 96T/48T
小鼠内皮脂肪酶(EL) Mouse Endothelial lipase ELISA Kit Y08246 96T/48T
小鼠碳酸酐酶(CA) Mouse carbonic anhydrase ELISA Kit Y08247 96T/48T
小鼠降钙素基因相关肽(CGRP) Mouse calcitonin gene related peptide ELISA Kit Y08248 96T/48T
小鼠胃动素(MTL) Mouse Motilin ELISA Kit Y08249 96T/48T
小鼠生长抑素(SS) Mouse Somatostatin ELISA Kit Y08250 96T/48T
小鼠纤维蛋白原(FB) Mouse FB ELISA Kit Y08251 96T/48T
小鼠横纹肌辅肌动蛋白α (Actinin α ) Mouse Actinin α ELISA Kit Y08252 96T/48T
小鼠肌球蛋白(Myosin) Mouse Myosin ELISA Kit Y08253 96T/48T
小鼠结蛋白(Desmin) Mouse Desmin ELISA Kit Y08254 96T/48T
小鼠组织相容性复合物(MHC) Mouse major histocompatibility complex ELISA Kit Y08255 96T/48T
小鼠上皮中性粒细胞活化肽(ENA-78). Epithelial neutrophil activating peptide-78 ELISA Kit Y08256 96T/48T
小鼠抗凝血酶(AT-III) Mouse AT-III ELISA Kit Y08257 96T/48T
小鼠神经肽(NPY) Rat neuropeptide Y ELISA Kit Y08258 96T/48T
小鼠生长激素释放多肽(ghrelin) Mouse ghrelin ELISA Kit Y08259 96T/48T
小鼠Gelsolin Mouse Gelsolin ELISA Kit Y08260 96T/48T
小鼠核因子活化因子受体配体(RANKL) Mouse receptor activator of nuclear factor kappaB ligand ELISA Kit Y08261 96T/48T
小鼠血栓前体蛋白(TpP) Mouse TpP ELISA Kit Y08262 96T/48T
小鼠促性腺激素释放激素(GnRH) Mouse GnRH ELISA Kit Y08263 96T/48T
小鼠抑制素B(INH B0 Mouse inhibin B ELISA Kit Y08264 96T/48T
小鼠促甲状腺素释放激素(TRH) Mouse thyrotropin-releasing hormone ELISA KIT Y08265 96T/48T
小鼠促肾上皮质激素释放激素(CRH) Mouse CRH ELISA Kit Y08266 96T/48T
小鼠胰岛素受体β(ISR-β) Mouse Insulin Receptor β(ISR-β)ELISA KIT Y08267 96T/48T
小鼠糖化血红蛋白(HbA1c) Mouse HbA1c ELISA Kit Y08268 96T/48T
小鼠LFA-3(CD58) Mouse lymphocyte function associated antigen-3 ELISA Kit Y08269 96T/48T
小鼠组织相容性抗原(HLA-2) Mouse HLA-2 ELISA Kit Y08270 96T/48T
小鼠组织相容性抗原(HLA-1) Mouse HLA-1 ELISA Kit Y08271 96T/48T
小鼠骨成型蛋白质7(BMP-7) Mouse Bone morphogenetic protein 7 ELISA Kit Y08272 96T/48T
小鼠透明质酸(HA) Mouse HA ELISA Kit Y08273 96T/48T
小鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3) Mouse 25(OH)D3 ELISA Kit Y08274 96T/48T
小鼠肌红蛋白(MYO) Mouse Myoglobin 人可溶性血管间黏附分子ELISA检测试剂盒ELISA Kit Y08275 96T/48T
小鼠血栓素(TXB2) Mouse Thromboxane B2 ELISA Kit Y08276 96T/48T
小鼠乙酰胆碱(ACh) Mouse acetylcholine ELISA Kit Y08277 96T/48T
小鼠组织多肽抗原(TPA) Mouse Tissue Polypeptide Antigen ELISA Kit Y08278 96T/48T
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