免费代测人组织因子 ELISA检测试剂盒说明书

试验原理：

TF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知TF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将TF和生物素标记的抗体同时温育。 ELISA检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中TF的浓度呈比例关系。

自备材料

1． 蒸馏水。

2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

1． 避免直接接触终止液和底物A、B。ELISA检测试剂盒一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

1600 pmol/L

（6号标准品）

原倍浓度不用稀释直接加入50ul。

800 pmol/L

（5号标准品）

100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

400 pmol/L

（4号标准品）

100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

200 pmol/L

（3号标准品）

100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

100 pmol/L

（2号标准品）

100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液

50 pmol/L

（1号标准品）

100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

0 pmol/L

（空白对照）

原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结 果 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的TF标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的TF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-1600pmol/L

4、敏感度： 1.0 pmol/L

Y175089 Anti-ABL2  ABL2蛋白抗体  0.2ml
Y175090 Anti-phospho-c-Abl(Tyr89)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175091 Anti-phospho-c-Abl(Thr735)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175092 Anti-phospho-c-Abl(Tyr204)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175093 Anti-phospho-c-Abl(Tyr245)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175094 Anti-phospho-c-Abl(Tyr412)  磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175095 Anti-c-Abl   非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体  0.1ml
Y175096 Anti-ABCG4  ABC膜转运蛋白抗体  0.2ml
Y175097 Anti-ABCG2  三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体  0.1ml
Y175098 ELISA检测试剂盒Anti-ABCG1  三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体  0.2ml
Y175099 Anti-ABCF1  ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体  0.2ml
Y175100 Anti-ABCB6  ATP结合蛋白家族6抗体  0.2ml
Y175101 Anti-ABCB5  ATP结合蛋白家族5抗体  0.2ml
Y175102 Anti-ABCD1/CCL22  嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗体  0.2ml
Y175103 Anti-ABCA1  腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗体  0.1ml
Y175104 Anti-AATF  拮抗凋亡转录因子抗体  0.2ml
Y175105 Anti-AATK  AATK细胞凋亡关联酪氨酸激酶抗体  0.2ml
Y175106 Anti-AAT  α-1抗胰蛋白酶抗体  0.1ml
Y175107 Anti-AARS2  丙氨酰tRNA合成酶2抗体  0.2ml
Y175108 Anti-AAK1  AP2关联激酶1抗体  0.2ml
Y175109 Anti-AACT-Alpha1  α-1抗胰糜蛋白酶抗体  0.1ml
Y175110 Anti-A2AR  腺苷A2A受体抗体  0.2ml
Y175111 Anti-8-OHdG  8-羟基脱氧鸟苷抗体  0.2ml