免费代测人抗核抗体ELISA 检测试剂盒使用说明

本试剂仅供研究使用  标本：血清或血浆

试验原理：

ANA试剂盒是间接法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ANA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ANA和生物素标记的抗体同时温育。人抗核抗体ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ANA的浓度呈比例关系。

自备材料

蒸馏水。
加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。

安全性

避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项

试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法

血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。

洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作步骤

使用前，将所有试剂充分混匀。人抗核抗体ELISA 检测试剂盒不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
在450nm波长处测定各孔的OD值。

局限

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到的结果。

试剂盒性能

1. 灵敏度：zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

结 果 判 断 与 分 析

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ANA标准品浓度为横坐标（X），人抗核抗体ELISA 检测试剂盒做得相应的曲线，样品的ANA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

3、检测值范围：0-8.0IU/ml

4、敏感度： 0.01 IU/ml
Ab-(001)-25532    Donkey Anti-rabbit IgG/FITC FITC标记的驴抗兔IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.3ml
Ab-(001)-25533    Donkey Anti-rabbit IgG/AP 碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗兔IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25534    Donkey Anti-rabbit IgG/RBITC 罗丹明标记的驴抗兔IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25535    Donkey Anti-rabbit IgG/Gold 胶体金标记的驴抗兔IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.5ml
Ab-(001)-25536    Donkey Anti-Goat IgG/Gold 胶体金标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.5ml
Ab-(001)-25537    Donkey Anti-Goat IgG/FITC FITC标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.3ml
Ab-(001)-25538    Donkey Anti-Goat IgG/AP 碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25539    Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25540    Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25541    Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25542    Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25543    Donkey Anti-Goat IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25544    Donkey Anti-Goat IgG/Cy3 Cy3标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25545    Donkey Anti-Goat IgG/Cy5 Cy5标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25546    Donkey Anti-Goat IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25547    Donkey Anti-Goat IgG/Cy7 Cy7标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25548    Donkey Anti-Goat IgG/PE PE标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25549    Donkey Anti-Goat IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml
Ab-(001)-25550    Donkey Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的驴抗羊IgG    ，品牌：    公司提供Santa、Abcam、MBL、CST等抗体品牌    ，规格：    0.1ml