ELISA检测试剂盒洗板不畅

    在ELISA检测试剂盒操作中，洗涤是zui主要的关键技术，操作时尤为注意：  
保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後在吸水纸或毛巾（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。）；  
注意各种试剂盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀释，应按要求稀释，所用的水电导率在1.5us/cm 之下，洗液如果结晶应待其融解後配制。  
保证洗板浸泡时间为40 秒左右，孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡。  
合理安排，或多用几台洗板机。  
在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。  
参考ELISA检测试剂盒洗涤  
显 色：  
结果不好的可能原因  
显色剂配制後放置时间过长或使用过期显色剂；  
加显色剂时溅出孔外造成液体回流。  
解决方法：  
显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；  
加样时保持显色剂不外流，且加样量要准确，顺序不能颠倒。  
A、B液应避免接触金属器械。  
可以参考ELISA#显色和比色  
终 止：  
结果不好的可能原因：  
加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。  解决办法：  
熟悉加样器的使用，在进行实验之前用水来练习加样的快速和准确；  
试验前标本需缓慢升温至室温，若标本为血清，冻结血清融解後，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清後再检测；  
加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出；  
加样後及时放入孵箱；  
加酶试剂後用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干；  
如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他後处理仪器加酶试剂；  
标本较多时，请分批操作。每次加样在两到三分钟内完成。加标本时三排一加。每次加完样进行计时；  
参考ELISA检测试剂盒加样  
温 育：  
不好的操作原因：  
温育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；  
温育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。  
解决办法：  
贴封片或加盖：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜复盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。  
按说明步骤严格控制操作时间。  
建议采用空气浴进行温育。  
参考ELISA实验操作中的温育（incubation）  
洗 板：  
结果不好的可能原因  
采用手工洗板,ELISA检测试剂盒孔与孔之间液体交叉。  
采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不*；洗板针堵塞，抽吸不*；导致洗板效果差。  
反应板过多造成洗板等待时间长。  
在间接法中如本底较高。