农杆菌浓度

    在实验室已初步建立的农杆菌EHA105介导银耳转基因方法的基础上，以银菌株Tr21-01为出发菌株，通过冻融法将携带有潮霉素磷酸转移酶(Hph)基由于遗传标记及人胰岛素基因(BAC)为目的基因的质粒pBHg-BCA导入根癌农杆菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并进一步介导转究。实验结L-1具有较高的转化率；GV3101转化率较低，且假阳性较高；LBA4404无抗性菌落长出。此结果表明不同的农杆菌侵染银耳芽孢能力具有差异性，且对受体侵染具有一定的特异性。

   本实验以农杆菌EHA105为参照菌株，对农杆菌AGL-1介导转化银耳进行研究。基于农杆菌介导转基因受诸多因素的影响，本实验从农杆菌与银耳芽孢共培养时间、银耳芽孢浓度、诱导剂乙酰丁香酮(AS)的浓度、转率等方面进行优化。其转化前提优化结果为：AGL-1菌液OD值为0.4～0.5，AS诱导培养浓度为250μg/mL、共培养浓度为150μ耳芽孢浓度为10~8/mL，共培养72h转化率zui高，可达500个/10~8，且阳性菌落为89%；EHA105菌液OD值为0.4～0.5。