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广东环凯生物科技有限公司
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肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR检测试剂盒【产品简介】本试剂盒基于PCR技术，并适用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的检测
肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR检测试剂盒
【产品简介】
本试剂盒基于PCR技术，并适用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的检测。
【检测原理】
利用2对特异性引物和PCR反应所需其他试剂，如反应缓冲液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待检DNA模板样品，即可进行PCR扩增反应。经比对扩增产物目标条带即可判定E/F型肉毒梭菌毒素基因。
【产品特点】
1. 快速简便：将酶、引物等反应组分混匀后进行干粉化处理，增加试剂稳定性，使用时减少溶液配制步骤，更为便捷，整个检测反应可在3 h内完成；
2. 特异性高：按照GB 4789.12−2016《食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》提供的目标基因引物，保证扩增反应的高度特异性；
3. 判读简单：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和紫外仪观察目标条带即可判别，直观方便。
【产品组分】
编号 | 组分名称 | 规格×数量 |
-- | 冻干试剂(bont E/F) | 8管×3排 |
-- | 复溶液 | 1 mL×1管 |
Y07 | 阳性对照 | 1管（冻干型） |
-- | 阴性对照 | 1管（冻干型） |
-- | 裂解液 | 1 mL×1管 |
-- | 超纯水 | 1 mL×1管 |
-- | 6×Loading buffer | 240 μL×1管 |
| 说明书 | 1份 |
【储存条件与保质期】
2~8℃条件下储存，有效期为12个月。
【所需其他材料和适用仪器】
1. PCR仪器、高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外仪、移液器、移液枪头及离心管等；
2. 琼脂糖、溴化乙锭（EB）或其他核酸染料。
【使用指南】
1. 样品前处理
1) 参照GB 4789.12−2016，挑取可疑菌落或待鉴定菌株接种TPGY，35℃±1℃厌氧培养24 h。吸取TPGY培养液1 mL至无菌离心管中，12000 r/min离心2 min，弃上清，加入30 μL裂解液，充分悬浮，转移至0.2 mL无菌离心管中，轻弹管壁消除气泡，99℃加热10 min；
2) 12000 r/min离心15 min，上清即为粗提的DNA，可转移至0.2 mL无菌离心管中，在-20℃下可长期保存。
2. 加样、反应
1) 使用时，分别加入80 μL超纯水至阳性对照和阴性对照管中，充分溶解，-20℃存储待用；
2) 取出干粉试剂，按照需求分别剪取n个检测试剂管（n=待检测样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每管加入18 μL复溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入复溶液的n个反应管中分别加入待测样品核酸、阴性对照、阳性对照各2 μL，紧盖后置于PCR仪中按设定的反应程序进行扩增反应；
4) PCR反应程序如下：
3. 结果判读
反应后每管中加入4 μL6×Loading buffer，混匀，并取8 μL经1.5%琼脂糖凝胶电泳，在紫外仪下观察，阴性对照无条带扩增，阳性对照中出现目标条带（参照图1），PCR试验结果成立。根据每个样品对应的反应产生的目标条带，即可判断肉毒梭菌毒素基因类型。若阴阳性对照管反应结果不符，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
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