从Western blot的繁重劳动中解放出来
摘要:
Western blot想一次成功,那几乎是mission impossible。这么多的环节,这么多的试剂,往往需要反复优化,才能获得理想的结果。然而,一家公司提出了一个很牛的口号,那就是“绝不多跑一次(Never Run a Gel Again)"。这家公司就是ProteinSimple。
Western blot想一次成功,那几乎是mission impossible。这么多的环节,这么多的试剂,往往需要反复优化,才能获得理想的结果。然而,一家公司提出了一个很牛的口号,那就是“绝不多跑一次(Never Run a Gel Again)"。这家公司就是ProteinSimple。
ProteinSimple不像其他公司那样,对传统的Western blot进行改进,而是*改造,利用毛细管电泳将整个过程自动化,创建出Simple Western分析。2011年,这家公司推出了Simon,*台自动化开展Western blot的仪器。它改变了我们对于Western blot的想象,堪称蛋白实验室的“dream machine"。这台仪器上市后,市场反应热烈。
2014年初,ProteinSimple又推出了三款仪器,分别是Wes、Sally Sue和Peggy Sue。Wes(韦斯)作为经济的Simple Western仪器,能够在3小时内分析多达25个样品。Sally Sue(萨莉?苏)和Peggy Sue(佩姬?苏)则是高通量的仪器,每次能够分析96个样品。此外,Peggy Sue还能按照电荷分离蛋白,大大节省样品的用量。
这些仪器将所有步骤自动化,包括蛋白分离、免疫杂交、洗涤、检测以及数据分析。你只需将样品、一抗、二抗和检测试剂加入微孔板,按下Start就行了。之后的几小时便由你自由支配。回来时,等着你的就是*分析好的数据了。
Simple Western可以两种方式开展 – 根据大小或电荷分离蛋白质。
基于大小的分析可在Wes、Peggy Sue或Sally Sue上开展。当蛋白沿着毛细管内一个堆积和分离基质迁移时,它们分离。分离后的蛋白固定到毛细管壁上。之后利用一抗鉴定目标蛋白,用HRP结合的二抗和化学发光底物检测蛋白。系统会自动报告检测蛋白的分子量和信号。
整个过程不需要手动操作,这大大减少了实验的可变性,提高了数据的重现性和可靠性。据统计,Western blot的实验差异性高达35-45%,而有了这些仪器,差异性能够控制在15%以下。对于25个样品的分析,Wes在3小时内即可完成。即使是96个样品,19个小时也能搞定。它们能分离和检测高达440 kDa的蛋白,这对研究大蛋白的童鞋来说真是福音。
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