细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒
产品编号 产品名称 包装
C0007 细胞凋亡-DNA Ladder 抽提试剂盒 50次
产品简介：
?瑞齐生产的细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒，是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非
常有效地抽提zui小片断为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因组DNA。
?DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
?本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。
包装清单：
产品编号 产品名称 包装
C0007-1 样品裂解液 30ml
C0007-2 蛋白酶K 130μl
C0007-3 10M 醋酸铵 6ml
C0007-4 TE 6ml
— 说明书 1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。10M 醋酸铵和TE也可以室温保存。
注意事项：
?需自备Tris平衡*、氯仿和无水乙醇。
?为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 样品收集
a） 对于组织样品：
切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。或直接冰浴上匀浆。
b） 对于贴壁细胞：
*消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c） 对于悬浮细胞：
1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. DNA ladder抽提
a） 每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b） 对于上述收集好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，Vortex混匀，充分
裂解组织或细胞。
c） 50℃水浴消化过夜（通常12-20小时皆可）。
d） 加入500微升Tris平衡*。
e） Vortex剧烈混匀，使有机相和水相充分混合，以达到抽提效果。4℃，12,000g离心5分钟。
f） 缓慢吸出酚相及中间相（可以吸除少量靠近中间相的水相液体），剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次（同步骤
e）。
g） 缓慢吸出酚相及中间相（可以吸除少量靠近中间相的水相液体），剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次（同步骤e）。
h） 慢慢吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。-
20℃冻存1小时，以充分沉淀小片断DNA。冻存过夜或-70℃冻存效果更佳。
i） 4℃，12, 000g 离心10分钟，弃上清。
j） 加入600微升70%乙醇，轻轻颠倒约2次。4℃，12, 000g 离心10分钟，小心吸去上清。注意：70%乙醇洗涤的时候，
千万注意避免损失一些细小的DNA沉淀，这些沉淀中大部分是你所需的DNA ladder。
k） 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100微升TE溶解DNA。注意：不可过分干燥基因组DNA
沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。
l） 取部分抽提得到的DNA，1%琼脂糖凝胶电泳分析。如果细胞发生凋亡，就可以观察到典型的DNA ladder。电泳时一
定要注意换用新鲜配制的电泳液，DNA凝胶也要用新鲜配制的电泳液配制并新鲜配制后使用。电泳时为获取*的
电泳效果使ladder充分分开，电泳速度宜适当慢一些，凝胶宜适当长一些，而加样孔宜更加扁平一些。选取适当较薄
的梳齿，往往会获得更好的ladder电泳效果。
使用本产品的文献：
1. Wang N, Hou L, Zhu ZY, Zhang JY, Ju CX, Ge YL, Yue W.
Effect of 2, 3-dioxo indoline on apoptosis and human omera se reverse transcr ipta se mRNA in SH2SY5Y cells.
Chinese Pharm acological B ulletin. 2007 May;23（5）:680～4.
2. Qian YF, Wang H, Yao WB, Gao XD.
Aqueous extract of the Chinese medicine, Danggui-Shaoyao-San, inhibits apoptosis in hydrogen peroxide-induced PC12 cells by preventing cytochrome c
release and inactivating of caspase cascade.
Cell Biol Int. 2008 Feb;32（2）:304-11.
3. Bai Y, Li Q, Yang J, Zhou X, Yin X, Zhao D.
p75（NTR） activation of NF-kappaB is involved in PrP106-126-induced apoptosis in mouse neuroblastoma cells.
Neurosci Res. 2008 Sep;62（1）:9-14. Epub 2008 May 23.
4. Cai L, Wang H, Li Q, Qian Y, Yao W.
Salidroside inhibits H2O2-induced apoptosis in PC12 cells by preventing cytochrome c release and inactivating of caspase cascade.
Acta Biochim Biophys Sin （Shanghai）. 2008;40（9）:796-802.
5. Wang H, Xu Y, Yan J, Zhao X, Sun X, Zhang Y, Guo J, Zhu C.
Acteoside protects human neuroblastoma SH-SY5Y cells against beta-amyloid-induced cell injury.
Brain Res. 2009 Aug 4;1283:139-47. Epub 2009 Jun 9.
6. Chai J, Xiong Q, Zhang P, Zheng R, Peng J, Jiang S.
Induction of Ca2+ signal mediated apoptosis and alteration of IP3R1 and SERCA1 expression levels by stress hormone in differentiating C2C12 myoblasts.
Gen Comp Endocrinol. 2010;166（2）:241-9. Epub 2009 Aug 31.
7. Li J, Xu Z, Tan M, Su W, Gong XG.
3-（4-（Benzo[d]thiazol-2-yl）-1-phenyl-1H-pyrazol-3-yl） phenyl acetate induced Hep G2 cell apoptosis through a ROS-mediated pathway.
Chem Biol Interact. 2010 Feb 12;183（3）:341-8. Epub 2009 Dec 16.
