石蜡切片免疫组化染色步骤
1、三步法（以SP试剂盒为例）
- 石蜡切片脱蜡至水
- 蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，如果采用抗原修复，可在此步后进行
- 3% H2O2 室温孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗，2分钟×3次
- 5~10%正常山羊血清封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜
- PBS冲洗，2分钟×3次
- 滴加适当比例稀释的*标记二抗（1%BSA-PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或滴加第二代*标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~20分钟
- PBS冲洗，2分钟×3次
- 滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS稀释），37℃孵育10~30分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~20分钟
- PBS冲洗，2分钟×3次
- 显色剂显色（DAB或AEC）
- 自来水充分冲洗，复染，脱水透明、封片
- 如果必要，可选用avdin封闭内源性*
2.SABC法
- 脱蜡、水化
- PBS洗2次各5分钟
- 用蒸馏水或PBS配制新鲜的3% H2O2 ，室温封闭5-10分钟，用蒸馏水洗3次
- 抗原修复
- PBS洗5分钟
- 滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟，甩去多余液体
- 滴加Ι抗50ul,室温静置1小时或4℃过夜或37℃1小时
- PBS洗3次各2分钟
- 滴加*化Ⅱ抗，20℃-37℃ 20分钟
- PBS洗3次各2分钟
- 滴加试剂SABC 20℃-30℃ 20分钟
- PBS洗4次各5分钟
- DAB显色：试剂盒或自配显色剂显色
- 脱水、透明、封片、镜检
备注：仅供科研实验使用，以上内容供参考，具体产品信息请来电或在线方式咨询。
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