PCR产物回收试剂盒说明书
本试剂盒可从PCR反应体系中回收得到不含盐或低盐、不含蛋白质、RNA 等杂质的高纯度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA的片段回收率 80%以上，并可回收单链、双链 DNA的片段以及环状质粒 DNA。回收得到的片段DNA均可直接进行酶切、酶连、测序反应。
本试剂盒采用一种*的平衡液处理吸附膜，该试剂能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附 DNA 的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。
试剂盒组成
成分 | PD6222-5T | PD6222-50T | PD6222-200T |
Buffer PG | 2.5 ml | 30 ml | 120 ml |
Buffer BL | - | 25 ml | 100 ml |
Buffer WB | 1.5 ml | 15 ml | 2×30ml |
Elution Buffer | 0.5 ml | 5 ml | 10 ml |
吸附柱G柱 | 5套 | 50套 | 200套 |
说明书 | 1 份 | 1 份 | 1 份 |
Buffer PG：开盖后如果长时间未使用，请检查Buffer PG的pH，确保pH≤7.5。
WB: 使用前请将6 ml(5T装)/60 ml（50T装）/240 ml（200T装）无水乙醇加入Buffer WB（试剂瓶上有标签提示）。
平衡吸附柱（选做）：加入500 μl Buffer BL到吸附柱G柱中，10,000×g离心1min以平衡吸附柱。
- 按照PCR产物：Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG（例如：50 μl PCR反应体系加入250 μl Buffer PG），颠倒混匀。若片段长度小于500 bp，按照1:6的比例加入Buffer PG。
- （选做）将装有混合液的EP管转至高速离心机，室温下10,000×g离心30 sec到1min，以甩下吸附在离心管壁的残留溶液，zui大限度提高回收率。
- 将上一步得到的混合液添加至本试剂盒提供的吸附柱G柱中（如一次无法加完，可分多次加入），室温下10,000×g离心1 min。弃掉收集管中的废液。如有需要，此步骤可以重复一次，对低浓度的核酸回收率有较明显提高。
- 向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ，室温下13,000×g离心1 min ，弃废液。
- 重复步骤4。
- 室温下13,000×g离心2 min以*甩下Buffer WB的残留。
- 取出吸附柱G柱并放入新的EP管中，将吸附柱G柱开盖室温下静置2 min，如有需要可放在空调风口吹1-2 min，以*去除残留的乙醇。
- 向吸附柱G柱正中间加入15-50 µl （建议用量为30μl）Elution Buffer或ddH2O（50℃水浴后的溶解液溶解效果更好），静置5 min待吸附的质粒*溶解，室温下13,000×g离心2 min即得到回收的DNA片段。
注：回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、扩增、测序、酶切等。
DNA浓度(µg/ml) = OD260 × 50× 稀释倍数，OD260/ OD280约为1.8-2.0。
本试剂盒只适用于琼脂糖凝胶电泳产物回收，不适用于聚丙烯酰胺凝胶回收。试剂盒中各成分均有一定的挥发性，请使用完后立即盖紧瓶盖，以防试剂污染或者挥发而造成效果降低。
常见问题 | 可能原因 | 建议 |
回收率低 或没条带 | PCR液过多 | 每次PCR液总量应当小于 300 μl。 |
Buffer WB 中没有 加入无水乙醇 | 确保 Buffer WB 中加入无水乙醇。 |
洗涤液使用不当 | 确保使用试剂盒提供的Buffer WB。 |
洗脱不充分 | 确保足够洗脱时间，Elution Buffer 用前 可55℃预热，直接测序或者酶切建议用去离子水溶解。 |
样品过少，浓度过低 | 加大样品用量。 |
回收产物 无法进行 后续实验 | 乙醇残留 | 室温低时，可适当延长晾干时间，或放在空调前吹干残留的乙醇 。 |
盐残留 | 确保洗涤液用量和洗涤次数，每次离心将液体离尽。 |
注：以上内容供参考，具体产品信息请来电或在线咨询。
