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Taq DNA polymerase实验常出问题及解决方案

阅读:411发布时间:2016-11-17

Taq DNA polymerase是94 kDa的耐热性DNA聚合酶及配合其使用的10×PCR Buffer以及6×Loading Buffer。是将改良后的DNA Polymerase的基因经过克隆转化到大肠杆菌中进行表达后,分离纯化而得到的性状优良,功能强大的DNA聚合酶。它比天然Taq DNA聚合酶有更加强大的功能以及更加高质量的活性。具有扩增速度快、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。使用本产品扩增得到的PCR产物的3′端会进行加“A”处理,因此,PCR产物可直接用于T载体的酶连中。

问题及解决方案:

假阴性,不出现扩增条带
  PCR反应的关键环节有模板核酸的制备引物的质量与特异性酶的质量 PCR循环条件。寻找原因应逐个排除。

  1. 假阳性
      出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。原因可能是引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。
  2. 出现非特异性扩增带
      PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。其原因:一是引物与靶序列不*互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。Mg2+浓度或者重新设计引物即可解决。

出现片状拖带或涂抹带
  PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。也需逐个排除。

注:内容供参考,具体产品信息请来电或在线咨询。

上海华壹生物科技有限公司
Shanghai HuaYi Bio-technology Co.,Ltd


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