质粒小提试剂盒实验操作步骤：
1. 接种菌种到1-5 ml 的液体培养基，37℃震荡培养12-16 h。室温下13,000 g离心1min，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB（Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，培养液OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2. 加入250 µl Buffer A，用涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不*，从而降低产量。
3. 加入 250 µl Buffer B, 轻轻地颠倒混匀5-10 次以混合均匀，此时溶液粘稠而澄清。
注：切勿剧烈振荡。此步骤时间不超过5 min，时间过长会导致基因组DNA污染或质粒受到损伤。若溶液未清亮澄清，则表明菌体裂解不充分，应加大Buffer B的用量或减少菌体量。
4. 加入350 µl Buffer C, 颠倒混匀5-10次，此时出现白色絮状沉淀。
5. 将离心管转至高速离心机，在室温下13,000×g离心10 min（若上清中有白色沉淀漂浮，可再次离心）。小心吸取离心后的上清液。
6. （选做）如果质粒扩增菌株为BL21等高表达蛋白菌株，可向上清中加入300μl的异丙醇，上下颠倒混匀。
7. 将上一步得到的上清液添加至本试剂盒提供的吸附柱P柱中（如一次无法加完，可分多次加入，吸取时应避免吸起沉淀），室温下10,000 ×g离心1 min。弃掉收集管中的废液。
8. 加入700 μl 的Buffer WB溶液（确保已加入无水乙醇），室温下13,000×g离心1 min ，弃废液。重复此步骤。
9. 室温下13,000×g离心2 min以*甩下Buffer WB残留。
10. 取出吸附柱P柱并放入新的EP管中，将吸附柱P柱开盖室温下开盖静置2 min，如有需要可放在空调风口吹1-2 min，以*去除残留的乙醇。
11. 向吸附柱P柱正中间加入30-100 µl (推荐50μl的溶解体积)Elution Buffer或ddH2O（56℃水浴后效果更好），静置5min待吸附的质粒*溶解，室温下13,000×g离心2 min即得到提取的质粒。
注：提取到的质粒 DNA可直接用于基因克隆、测序、酶切、文库筛选、体外转录翻译、转染细胞。若用于转染内毒素敏感性细胞株，原代细胞及用于微注射，建议去除内毒素。
