实验步骤
一、提取
粮食类（花生、玉米等）：称取20g粉碎过筛样品（面粉不需粉碎）。置于250ml具塞锥形中，加30ml正已烷或石油醚和100ml甲醇-水溶液，润湿瓶塞，盖紧颜漏，振摇30min，静置分层，以叠成折叠式快速定性滤纸过滤于带刻度的125ml分液漏斗中，待下层甲醇-水溶液分清后，放出20ml甲醇-水溶液于第二个125ml分液漏斗内，并加入20ml三氯甲烷，振摇2min。静置分层，如出现乳化现象可滴加少许甲醇促使分层，将三氯甲烷层通过装有约10g*玻璃漏斗后，流入全玻璃浓缩瓶中，然后用数毫升三氯甲烷洗涤*层，一并收集于浓缩瓶内，在60～70℃水浴中减压浓缩至干后，用苯-乙腈混合液定容至1.0ml，即为分析样液。
花生油、香油、菜油等：称取4 g油样于小烧杯中，用20ml正已烷或石油醚将油样全部转至125ml刻度分液漏斗中，再用20ml甲醇-水分次洗烧杯，洗液一并转至上述分液漏斗内，振摇2min，静置分层后，将下层甲醇-水放入第二个125ml刻度分液漏斗中，在原分液漏斗中再加5ml甲醇-水溶液重复提取一次，提取液一并移入第二个分液漏斗中，并在第二分液漏斗中加入20ml三氯甲烷，以下按“花生、玉米等粮食类”自“振摇2min，静置分层”起依法操作。
二、薄层层析
（1）、薄层板的制备：称取约14g硅胶G加36～40ml水，在研钵中研成糊状后立即倒入涂布器内，可涂成厚度约0.25mm的5 cm×20cm玻璃板8块，或10cm×20cm玻璃板4块，或20cm×20cm玻璃板2块，室温干燥约15min后，置105～110℃烘箱内活化1 h，取出，放于干燥器内备用，放置时间超过一周时，需重新活化后再用。
（2）、初步层析与确证
（2）-1、衍生物法：黄曲霉毒素B1和G1能与二氟乙酸反应产生衍生物（其比移值B1＞G1）。B2、G2不起反应。于一块5 cm×20cm的薄层板上，以距薄层板下端3 cm为基线，自左端约1 cm起沿基线1 cm等距点四个点，*点为2μl标准混合使用液；第二点为20μl样液；于以上两点各加三氟乙酸1小滴，反应5min后，用低于40℃热风吹2min，冷却后，再依次点第三点为2μl混合标准使用液；第四点为20μl样液；吹干。将薄层板放入装有10ml乙醚的展开槽内，展至13cm处，取出吹干后，再用10ml丙酮-三氯甲烷（1+9）展开剂再展一遍，取出吹干后，在紫外光下观察样液是否产生与黄曲霉毒素B1、G1标准点相同的衍生物，未加三氟乙酸的三、四两点，可依次作为样液与标准的衍生物空白对照。
（2）-2、黄曲霉毒素G1和G2的确证：可用苯-乙醇-水（46+35+19）展开，若标准点与样液点出现重叠，即可确定。
（2）-3、在展开的薄层板上喷以硫酸（1+3），吹干后，则黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2都变为黄色荧光。
三、定量测定：经确证的阳性样品进行薄层分离和定量测定。
（1）、连续层析法
*点板：将10cm×20cm的薄层硅胶板用橡皮刮塞刮去左右两边硅胶层各1 cm，以距底边1.5cm处为基线。自左1 cm开始，以1 cm间距依次滴加黄曲霉毒素混合标准使用液1，3，5，7，10μl，依次相当于B1、G1 0.2，0.6，1.0，1.4，2.0ng；B2、G2 0.1，0.3，0.5，0.7，1.0 ng和样液点。滴加样液体积依样品含黄曲霉毒素含量而定。
**展开：室温20℃，相对湿度约70％条件下，按以下条件进行连续层析分离。
乙醚饱和：7min；
预展：10min；
丙酮-三氯甲烷（7+93）饱和：10min；
展开：15min后，取出吹干。
***观察：于紫外光下，在标准点和与标准比移值相同的样液点下方，用针尖轻刺标记，以确定各点的扫描起点，然后进行扫描测定。
****双向展开法
****点板：于20cm×20cm薄板上.
提示：本文植物油中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定方法属于生化实验文章，主要介绍黄曲霉方面的知识，内容仅供学习交流与参考.
